[发明专利]桑脉带相关病毒检测引物和质粒及检测方法在审

专利信息
申请号: 201810552526.9 申请日: 2018-05-31
公开(公告)号: CN108559791A 公开(公告)日: 2018-09-21
发明(设计)人: 刘吉平;孙勋勋;周轶楠 申请(专利权)人: 华南农业大学
主分类号: C12Q1/70 分类号: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11;C12N15/63;C12R1/94
代理公司: 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 代理人: 单香杰
地址: 510642 广*** 国省代码: 广东;44
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摘要:
搜索关键词: 脉带 质粒 检测 引物 核苷酸序列 病毒检测 检测引物 扩增引物 病原菌 病毒 阳性对照质粒 检测结果 片段构建 特异性强 灵敏度 构建 扩增
【说明书】:

发明公开了一种桑脉带相关病毒检测引物和质粒及检测方法。所述检测引物包括引物对S2776F和S3225R,其核苷酸序列分别依次如SEQ ID NO:1~2所示。同时构建了用于检测的阳性对照质粒,以扩增引物对1S1809F和1S3248R扩增获得1441bp大小的片段构建质粒1S‑pEASY‑Bblunt,所述质粒及扩增引物对的核苷酸序列分别依次如SEQ ID NO:3~5所示。基于本发明检测引物可特异地检测桑脉带相关病毒,检测结果可靠、易于操作、特异性强、灵敏度高。尤其针对病株的叶、芽、枝等组织上存在的病原菌进行检测,对桑脉带相关病毒的防控有重要的指导意义。

技术领域

本发明涉及植物病原分子检测技术领域,具体地,涉及桑脉带相关病毒检测引物和质粒及检测方法。

背景技术

桑树是养蚕业的重要原料,也是药食两用的经济林作物,在食品保健、畜禽饲料、生态修复等方面得到了广泛的应用,且越来越受到人们的重视。桑花叶病作为最重要的桑树病毒病之一,在我国各蚕区发生较普遍且危害严重。桑花叶病为植物病毒病,会导致桑叶质量变差、产量下降、植株矮小和桑树抵抗力下降等问题,严重的制约着蚕桑产业的健康稳定发展。随着桑树产业的发展,目前有关桑花叶病的发生规律、检测技术和防控手段等问题亟待解决。

随着分子生物学的发展,通过高通量测序的手段发现桑中存在的一些病毒会引起桑花叶病,如蒙姣荣等(2015)通过高通量测序及酵母双杂交系统在桑花叶病病叶中发现并鉴定到了桑脉带相关病毒(mulberry vein banding-associated virus, MVBaV)。MVBaV是广西桑树病毒病主要病原,该病毒是番茄斑萎病毒属新成员,具有番茄斑萎病毒属典型的基因组结构,为RNA病毒。

在桑病毒病病原的鉴定上,由于病毒小、难分离、不可培养等特点,使其在柯赫式法则验证上存在困难,以至于阻碍了桑病毒病的发展。桑病毒病的防控主要靠隔离病原,由于桑病毒病存在潜隐现象,在不适宜的条件不会产生病症,以至于难以辨别没有症状的桑叶是否携带病原,以至于很难隔离防控。目前桑病毒病大多通过发病后病症来判断,分子检测手段应用较少。而现有技术中桑脉带相关病毒的研究较少,因此急需开发研究一种能有效检测MVBaV的方法或技术手段。

病原的早期检测是控制病毒病的有效措施,将病疫扼杀在摇篮中。常规的检测手段包括生物学测定法、电子显微、血清学检测和分子生物学检测。随着现代科学的发展,病原检测技术将朝着简便、快速、准确、有效的检测方向发展,结合多种技术对病毒进行检测,将大大提高检测的速度和精确度。目前常用的单一技术有PCR、免疫捕获、巢式反应、环介导等温扩增、荧光定量等。目前尚未见有将PCR技术应用于桑脉带相关病毒的检测中。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有桑脉带相关病毒的预测监控技术的缺陷和不足,提供一种在桑脉带相关病毒出现明显病症、病害大规模爆发前,检测叶片中病原菌的存在及其含量的技术,进而对桑园叶片等进行及时相应的处理。

本发明的第一个目的是提供一种桑脉带相关病毒特异性检测引物,并基于所述检测引物成功建立了检测桑脉带相关病毒的PCR技术。

本发明的另一目的在于提供上述桑脉带相关病毒特异性检测引物在桑脉带相关病毒分子检测中的应用或在制备桑脉带相关病毒分子检测产品方面的应用。

本发明的另一目的在于提供一种桑脉带相关病毒特异性检测试剂盒。

本发明的另一目的在于提供SEQ ID NO:3所示桑脉带相关病毒核壳体蛋白基因序列的1S片段在桑脉带相关病毒分子检测中的应用或在制备桑脉带相关病毒分子检测产品方面的应用。

本发明的另一目的在于提供一种阳性对照质粒1S-pEASY-Bblunt。

本发明的另一目的在于提供上述阳性对照质粒1S-pEASY-Bblunt在桑脉带相关病毒分子检测中的应用或在制备桑脉带相关病毒分子检测产品方面的应用。

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