[发明专利]表面偶联心肌肌钙蛋白抗原的磁性高分子微球及其在检测血清中心肌肌钙蛋白中的应用

说明书

一种表面偶联心肌特异性肌钙蛋白抗原的磁性高分子微球及其在检测血清中心肌特异性肌钙蛋白中的应用，属于生物技术领域。本发明基于化学偶联法将心肌特异性肌钙蛋白抗原(cTnT抗原)偶联到磁性高分子微球表面，从而制备表面具有cTnT抗原的功能化磁性高分子微球，该微球可用于血清中心肌特异性肌钙蛋白浓度的检测。本发明具快速获取样品、多参数分析、高分辨率等优点，本检测方法操作简便、可靠性强、获取数据量大，而磁性高分子微球的应用，更是简化了操作程序、减少非特异性吸附，本检测手段应用竞争模式更是节省了试剂的损耗。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种表面偶联心肌特异性肌钙蛋白抗原的磁性高分子微球及其在检测血清中心肌特异性肌钙蛋白中的应用。

背景技术

急性心肌梗死(AMI)因持久而严重的心肌缺血所致的部分心肌急性坏死，是一种较为常见的临床疾病，其主要特征是发病急，病情凶险，而且危害极大，及时的诊断并采取有效治疗是降低该种疾病病死率、致残率的主要措施。AMI的诊断标准有三个：缺血性胸痛临床史、心电图的动态演变、AMI的血清标志物的动态变化，其中血清学的动态变化是该疾病的诊断意义重大。目前对于急性心肌梗死的诊断大多采用的是心肌三项血清标志物(cTnT、Mb、CK-MB)联合检测诊断法，具有较高的应用价值，其中cTnT称为心肌特异性肌钙蛋白，美国及欧洲心脏病学会已经将cTnT的指标变化作为诊断AMI的首要条件。

磁性高分子微球是一种新型功能材料，其大的比表面积、磁导向性以及良好的生化活性等诸多优点，在生物医学领域方面具有巨大的应用前景。磁性高分子微球具有强的磁响应性，如果在微球表面修饰抗原、抗体、寡聚核苷酸等生物探针，可以将靶向结合物快速与基质溶液分离，极大的缩短了样品的分析时间，而且还能提高分离效率，大大的降低了非特异性吸附。利用磁性高分子微球强分离能力与一些生化检测手段进行结合，可以提高大幅度提高检测手段的灵敏度。基于磁性高分子微球表面修饰不同的功能基团或者结合单克隆抗体，从而与抗原等迅速分离，主要应用有酶固定、细胞快速分离、疾病标志物诊断等等方面都表现出广阔的应用前景。

流式细胞术是在细胞分子水平上通过单克隆抗体对单个细胞或者其他生物颗粒进行多参数、快速的定量分析。它可以高速分析上万个细胞或者微球，并能从其中测得多个参数，具有速度快、精准度高、准确性好的优点，是当今主流的定量分析技术之一。

发明内容

本发明目的在于提供一种表面偶联心肌特异性肌钙蛋白抗原的磁性高分子微球及其在检测血清中心肌特异性肌钙蛋白中的应用。

本发明基于化学偶联法将心肌特异性肌钙蛋白抗原(cTnT抗原)偶联到磁性高分子微球表面，从而制备表面具有cTnT抗原的功能化磁性高分子微球。试剂如下：兔抗cTnT抗原的抗体，也即一抗，异硫氰酸(FITC)标记的山羊抗兔二抗(goat anti-rabbit IgG/FITC)，也即荧光二抗。