[发明专利]一种铁线莲叶斑病致病菌的筛选方法在审
| 申请号： | 201810554929.7 | 申请日： | 2018-05-31 |
| 公开（公告）号： | CN108641963A | 公开（公告）日： | 2018-10-12 |
| 发明（设计）人： | 宋微;王磊;张虎;杨广荣;周莉;刘梦 | 申请（专利权）人： | 江苏农林职业技术学院 |
| 主分类号： | C12N1/04 | 分类号： | C12N1/04;C12N1/14;C12R1/645;C12R1/77 |
| 代理公司： | 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204 | 代理人： | 李倩 |
| 地址： | 212400 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 铁线莲 致病菌 菌落 初筛培养基 叶斑病 无菌生理盐水 筛选 分离效果 连续分离 叶片培养 青霉素 纯培养 稀释液 悬浮液 稀释 坏死 悬液 制备 成熟 | ||
1.一种铁线莲叶斑病致病菌的筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1，致病菌悬液的制备：取带有叶斑的铁线莲叶片，切碎后置无菌生理盐水中，混合物溶液的浓度为20～25％，于一定温度下培养得到致病菌悬液；
步骤2，初筛培养基的制备：往PDA培养基中加入100u/mL青霉素，混合均匀后，灭菌，得到初筛培养基；
步骤3，致病菌落群培养：将步骤1中的致病菌悬液用无菌生理盐水梯度稀释成各个浓度的稀释液，每个浓度下取1mL稀释液涂布于步骤2的初筛培养基上进行培养，获得致病菌落群；
步骤4，单菌落培养：挑取初筛培养基上长出的菌落，接种至含铁线莲汁的培养基中进行纯培养，反复分：3～5次，获得的单一菌落为致病菌落；
步骤5：从初筛菌种中筛选出铁线莲叶斑病致病菌，再进行鉴定，确定致病菌的种类。
2.根据权利要求1所述的铁线莲叶斑病致病菌的筛选方法，其特征在于：步骤1中，致病菌悬液的培养条件为：于25℃，2500rpm振荡条件下培养30～35min。
3.根据权利要求1所述的铁线莲叶斑病致病菌的筛选方法，其特征在于：步骤2中，灭菌条件为121℃下灭菌25～30min。
4.根据权利要求1所述的铁线莲叶斑病致病菌的筛选方法，其特征在于：步骤3中，对致病菌悬液进行梯度稀释，得到的梯度稀释液浓度为10-5、10-6、10-7。
5.根据权利要求1所述的铁线莲叶斑病致病菌的筛选方法，其特征在于：步骤3中，培养条件为24～26℃下培养72～78h。
6.根据权利要求1所述的铁线莲叶斑病致病菌的筛选方法，其特征在于：步骤4中，含铁线莲汁的培养基中，铁线莲汁的质量浓度为10～15％。
7.根据权利要求1所述的铁线莲叶斑病致病菌的筛选方法，其特征在于：步骤5中，筛选方法为培养基验证和铁线莲验证试验。
8.根据权利要求1所述的铁线莲叶斑病致病菌的筛选方法，其特征在于：步骤5中，致病菌的种属为：镰刀菌属、尖镰孢菌和链格饱属。
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