[发明专利]重金属活化微生物筛选方法

权利要求书

1.重金属活化微生物筛选方法，其特征在于：其包括以下步骤：

步骤一、采集样品，制备样品悬液，并于初筛培养基上培养一段时间后初步筛选出具有活化功能的初选菌株；

步骤二、将初选菌株置于纯化培养基中进行多次划线及分离纯化；

步骤三、将经步骤二纯化后的纯化菌株接种于复筛培养基上培养一段时间，根据透明圈直径D与菌落直径d计算（D-d）/d比值，其中（D-d）/d比值大于0，筛选得到所需的活化微生物。

2.根据权利要求1所述的重金属活化微生物筛选方法，其特征在于：在步骤一中，采用不同地区的重金属污染土壤作为样品，将样品和无菌水按一定比例混合均匀，制得样品悬液；其中，样品和无菌水之间满足以下比例关系：10.0～15.0 g：90～110 mL。

3.根据权利要求1所述的重金属活化微生物筛选方法，其特征在于：在步骤一中，在制得样品悬液后，采用无菌水对样品悬液进行稀释，获得多种不同浓度的样品稀释液，然后将样品稀释液涂布在初筛培养基上进行培养。

4.根据权利要求1所述的重金属活化微生物筛选方法，其特征在于：在步骤一中，初筛培养基的配方原料包括10g/L的葡糖糖、5g/L的蛋白胨、5g/L的酵母粉、5g/L的氯化钠、1-10mL/L的Cd²⁺溶液、及1-10 mL/L的PO₄^3-溶液或1-10 mL/L的CO₃²-溶液或1-10 mL/L的OH^-溶液，初筛培养基的pH值为6.5-7.5。

5.根据权利要求1所述的重金属活化微生物筛选方法，其特征在于：在步骤一中，培养条件为：在28-37℃下倒置培养48-72h；初选菌株包括细菌菌株、放线菌菌株和真菌菌株。

6.根据权利要求1所述的重金属活化微生物筛选方法，其特征在于：在步骤二中，纯化培养基包括NA培养基、高氏一号培养基和PDA培养基。

7.根据权利要求5所述的重金属活化微生物筛选方法，其特征在于：在步骤三中，当初选菌株为细菌菌株或放线菌菌株时，所述复筛培养基的配方原料包括：NA培养基、1-10 mL/L的Cd²⁺溶液、及1-10 mL/L的PO₄^3-溶液或1-10 mL/L的CO₃²-溶液或1-10 mL/L的OH^-溶液；当初选菌株为真菌菌株时，所述复筛培养基的配方原料包括：PDA培养基、1-10 mL/L的Cd²⁺溶液、及1-10 mL/L的PO₄^3-溶液或1-10 mL/L的CO₃²-溶液或1-10 mL/L的OH^-溶液。

8.根据权利要求4或7所述的重金属活化微生物筛选方法，其特征在于：所述Cd²⁺浓度为0.5-2.5mol/L，PO₄^3-浓度为0.5-2.5mol/L，CO₃^2-浓度为0.5-2.5mol/L，OH^-浓度为0.5-2.5mol/L。

9.根据权利要求8所述的重金属活化微生物筛选方法，其特征在于：Cd²⁺溶液由硝酸镉、硫酸镉、氯化镉中的一种或几种配制而成，PO₄^3-溶液由磷酸氢二钠、磷酸氢二钾、磷酸氢二铵、磷酸钾中的一种或几种配制而成，CO₃^2-溶液由碳酸钠、碳酸钾、碳酸铵中的一种或几种配制而成，OH^-溶液由氢氧化钠、氢氧化钾、氨水中的一种或几种配制而成。

10.根据权利要求1所述的重金属活化微生物筛选方法，其特征在于：在步骤二中，培养条件为：在28-37℃下倒置培养16-24h；在步骤三中，培养条件为：在28-37℃下倒置培养72h。