[发明专利]一种用于肺癌靶向治疗的RNA纳米水凝胶及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种用于肺癌靶向治疗的RNA纳米水凝胶，其特征在于，所述RNA纳米水凝胶包括DNA自组装单链、成环DNA模板和靶向适配体；

所述DNA自组装单链包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的ASM-DNA-1、核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的ASM-DNA-2和核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的ASM-DNA-3，三条DNA单链分别以序列中间为节点，两端两两互补配对，构成三叉型自组装结构；

所述成环DNA模板包括5’端经磷酸化的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的Three-let7a、5’端经磷酸化的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示的Three-miR 34a和5’端经磷酸化的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示的Three-miR 145，所述成环DNA模板通过序列两端的T7启动子互补序列，与所述三叉型自组装结构的分支末端的T7启动子序列互补结合；

所述靶向适配体为SEQ ID NO.7所述序列的5’端修饰有荧光基团、3’端修饰胆固醇的物质；所述靶向适配体通过T7启动子互补序列与成环DNA模板结合。

2.根据权利要求1所述RNA纳米水凝胶，其特征在于，所述RNA纳米水凝胶的粒径为80～200nm。

3.根据权利要求1所述的RNA纳米水凝胶，其特征在于，所述荧光基团包括FAM、FITC或Cy3。

4.权利要求1～3任意一项所述RNA纳米水凝胶的制备方法，包括以下步骤：

1)将DNA自组装单链与成环DNA模板于Tris-HCl缓冲液中混合进行退火处理，所述退火处理的条件为：95℃，5min，再以0.5℃/min的速度降至16～28℃，得到三叉型自组装结构载体；

2)将步骤1)得到的三叉型自组装结构载体与T4连接酶及T4连接酶缓冲液混合，16℃进行成环反应，得到含有环状模板的三叉型自组装结构载体；

3)将步骤2)得到的含有环状模板的三叉型自组装结构载体与核苷酸三磷酸混合液、RNA酶抑制剂和T7聚合酶及T7聚合酶缓冲液混合，37℃进行滚环转录反应0.5～3h，得到结合环状DNA的载体；

4)将步骤3)得到的结合环状DNA的载体与靶向适配体混合，进行退火处理，所述退火处理的条件为：65℃，5min，再以0.5℃/min的速度降至16～28℃，得到用于肺癌靶向治疗的RNA纳米水凝胶。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤1)所述Tris-HCl缓冲液的pH值为7.4～8.0。

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述DNA自组装单链与成环DNA模板的混合体积比为1∶(0.8～1.2)。

7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤4)中所述结合环状DNA的载体与靶向适配体的混合体积比为1∶(90～110)。

8.权利要求1～3任意一项所述RNA纳米水凝胶或权利要求4～7任意一项所述制备方法得到的RNA纳米水凝胶在制备靶向抑制肺癌细胞药物中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述肺癌细胞包括A549细胞系。

10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述药物中RNA纳米水凝胶的有效剂量为30～150μL。