[发明专利]一种用于肺癌靶向治疗的RNA纳米水凝胶及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种用于肺癌靶向治疗的RNA纳米水凝胶及其制备方法和应用，属于生物化学纳米材料技术领域。本发明提供的用于肺癌靶向治疗的RNA纳米水凝胶包括DNA自组装单链、成环DNA模板和靶向适配体。本发明所述肺癌靶向治疗的RNA纳米水凝胶包含可发挥基因调控作用的microRNA，能够减弱肺癌细胞的迁移和侵袭力，对肺癌细胞能够进行有效的抑制，且本发明RNA纳米水凝胶特异性靶向作用好，能精准地作用于靶向细胞，本发明提供了一种极具潜力的药物纳米载体。

技术领域

本发明涉及生物化学纳米材料技术领域，具体涉及一种用于肺癌靶向治疗的RNA纳米水凝胶及其制备方法和应用。

背景技术

肺癌是最常见的恶性肿瘤之一，其死亡率居于所有癌症导致死亡的前列。近年来，肺癌的发病率在全球范围内不断上升，严重威胁着人类的健康。确定新的治疗策略从而进行有效的治疗已是迫在眉睫。

对于肺癌的治疗，目前现有的治疗技术多采用手术治疗及放射治疗。而手术治疗存在创伤大，风险高，易产生并发症等缺陷，而放射治疗对于机体正常组织的损害则较大。

microRNA是一种广泛表达于植物和动物体内的只有17-22个核苷酸的短链、非编码、新型的基因调控因子。已有的研究表明，microRNA参与了各种细胞生命活动，尤其是在癌症中，microRNA可作为致癌基因或抑癌基因，有效调控癌细胞内的相关蛋白。

在国内外相关技术的报道中有将microRNA用于基因调控作用，进而进行癌症的基因治疗，但是大多数为单一的基因发挥作用且不具有靶向识别作用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于肺癌靶向治疗的RNA纳米水凝胶及其制备方法和应用。本发明所述肺癌靶向治疗的RNA纳米水凝胶包含可发挥基因调控作用的microRNA，能够减弱肺癌细胞的迁移和侵袭力，对肺癌细胞能够进行有效的抑制，且本发明RNA纳米水凝胶特异性靶向作用好，能精准地作用于靶向细胞，本发明提供了一种极具潜力的药物纳米载体。

本发明提供了一种用于肺癌靶向治疗的RNA纳米水凝胶，所述RNA纳米水凝胶包括DNA自组装单链、成环DNA模板和靶向适配体；

所述DNA自组装单链包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的ASM-DNA-1、核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的ASM-DNA-2和核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的ASM-DNA-3，三条DNA单链分别以序列中间为节点，两端两两互补配对，构成三叉型自组装结构；

所述成环DNA模板包括5’端经磷酸化的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的Three-let7a、5’端经磷酸化的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示的Three-miR 34a和5’端经磷酸化的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示的Three-miR 145中的一种或多种，所述成环DNA模板通过序列两端的T7启动子互补序列，与所述三叉型自组装结构的分支末端的T7启动子序列互补结合；

所述靶向适配体为SEQ ID NO.7所述序列的5’端修饰有荧光基团、3’端修饰胆固醇的物质；所述靶向适配体通过T7启动子互补序列与成环DNA模板结合。

优选的是，所述RNA纳米水凝胶的粒径为80～200nm。

优选的是，所述荧光基团包括FAM、FITC或Cy3。

本发明还提供了上述技术方案所述RNA纳米水凝胶的制备方法，包括以下步骤：

1)将DNA自组装单链与成环DNA模板于Tris-HCl缓冲液中混合进行退火处理，所述退火处理的条件为：95℃，5min，再以0.5℃/min的速度降至16～28℃，得到三叉型自组装结构载体；

2)将步骤1)得到的三叉型自组装结构载体与T4连接酶及T4连接酶缓冲液混合，16℃进行成环反应，得到含有环状模板的三叉型自组装结构载体；