[发明专利]利用碱基编辑修复FBN1T7498C 有效
| 申请号： | 201810560722.0 | 申请日： | 2018-06-01 |
| 公开（公告）号： | CN108753778B | 公开（公告）日： | 2021-11-02 |
| 发明（设计）人： | 黄行许;李广磊;李佳楠 | 申请（专利权）人： | 上海科技大学 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/90;C12N5/10 |
| 代理公司： | 上海申汇专利代理有限公司 31001 | 代理人： | 翁若莹;王婧 |
| 地址： | 200120 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 利用 碱基 编辑 修复 fbn1 base sup t7498c | ||
1.一种高效修复FBN1T7498C突变的试剂盒，其特征在于，包括碱基编辑系统以及针对FBN1T7498C位点的修复re-sgRNA；所述的针对FBN1T7498C位点的修复re-sgRNA的序列为SEQ IDNO.3。
2.如权利要求1所述的高效修复FBN1T7498C突变的试剂盒，其特征在于，所述的碱基编辑系统为BE3，YE1-BE3，YE2-BE3或者YEE-BE3中的一种。
3.一种制作突变和修复突变的组合，其特征在于，包括根据FBN1T7498C位点设计突变mt-sgRNA和相应的突变ssODN、针对FBN1T7498C位点的修复re-sgRNA以及碱基编辑系统；所述的mt-sgRNA的序列为SEQ ID NO.1，ssODN的序列为SEQ ID NO.2，re-sgRNA的序列为SEQ IDNO.3。
4.一种非治疗目的的碱基编辑修复突变的方法，其特征在于，包括：在含有FBN1T7498C的突变细胞中，利用针对FBN1T7498C位点的修复re-sgRNA引导碱基编辑系统到突变位点进行碱基编辑修复，收集转染后的细胞；所述re-sgRNA的序列为SEQ ID NO.3。
5.如权利要求4所述的碱基编辑修复突变的方法，其特征在于，所述的含有FBN1T7498C的突变细胞为HEK293T细胞。
6.如权利要求4所述的碱基编辑修复突变的方法，其特征在于，所述的含有FBN1T7498C的突变细胞的构建方法为：根据FBN1T7498C位点设计突变mt-sgRNA和相应的突变ssODN；构建mt-sgRNA的表达载体，体外将Cas9蛋白和转录出来的mt-sgRNA组成RNP结合ssODN的方式并电转HEK293T细胞，流式分选单细胞鉴定出含有FBN1T7498C的突变细胞株；所述的mt-sgRNA的序列为SEQ ID NO.1，ssODN的序列为SEQ ID NO.2。
7.如权利要求4所述的碱基编辑修复突变的方法，其特征在于，所述的针对FBN1T7498C位点的修复re-sgRNA通过根据FBN1T7498C位点设计修复re-sgRNA，并构建U6启动和/或T7启动的表达载体得到。
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