[发明专利]一种提高核移植胚胎体外发育效率的方法

权利要求书

1.一种提高猪核移植胚胎体外发育效率的方法，其特征在于，包括：将激活后的猪核移植重构胚，转入含BET蛋白抑制剂(+)-JQ1的胚胎培养液中培养72h，所述BET蛋白抑制剂在培养液中浓度为10-20 nmol/L；再换为不含BET抑制剂的胚胎培养液继续培养至168h，所述猪核移植重构胚的制备过程包括：（1）将猪耳皮组织碎块用DMEM清洗后用适量胎牛血清重悬，于37℃、5%CO₂、饱和湿度环境中培养5-7h后添加含10%胎牛血清的DMEM培养液，待细胞长至90%汇合时进行传代，用传至第2代的体细胞作为核移植的供体细胞；（2）采集卵丘-卵母细胞复合体COCs，用洗卵液洗3遍后，再用成熟培养液洗2遍，然后放入成熟培养液中，于39℃、5%CO₂、饱和湿度环境中成熟培养44h；（3）将成熟培养后的COCs与0.1%透明质酸酶混合，去除卵丘细胞，并挑选出卵周隙明显且无杂质、胞质均匀、明显排出第一极体的卵母细胞；（4）将卵母细胞使用荧光照射的方法确定核的位置，并移除卵母细胞核，在卵周隙注入一个供体细胞完成胚胎重构过程；（5）将重构卵分批放入已经铺满激活液的融合槽内，使供体细胞-受体卵细胞膜接触面与电极平行，用100 v/mm、80μs、2次脉冲直流电诱导融合同时激活，然后将融合的重构胚用胚胎培养液洗涤后，转入预平衡的含有5μg/ml细胞松弛素B（CB）的胚胎培养液培养4h，获得激活后的核移植重构胚。