[发明专利]一种提高核移植胚胎体外发育效率的方法

说明书

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种提高核移植胚胎体外发育效率的方法。本发明提供的提高核移植胚胎体外发育效率的方法，包括：将激活后的核移植重构胚，转入含BET蛋白抑制剂(+)‑JQ1的胚胎培养液中培养。本发明方法可以抑制细胞定向转录记忆，促进了核移植胚胎重编程，从而提高体细胞核移植胚胎的体外发育效率。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种提高核移植胚胎体外发育效率的方法。

背景技术

自从1997年首例体细胞克隆哺乳动物“多莉”羊出生以来，陆续有克隆动物出生的报道，然而，克隆动物的整体效率仍然较低。

在所有通过体细胞核转移(SCNT)生产的哺乳动物中，有缺陷的表观遗传重编程可能是低成功率的主要原因。组蛋白修饰和DNA甲基化是阻碍体细胞重新编程成为多能状态的主要因素。研究表明，与体内受精胚胎相比，体细胞核移植胚胎中出现了大量异常DNA和组蛋白甲基化、组蛋白乙酰化模式。表观遗传异常可导致早期胚胎发育异常的基因表达，导致克隆动物出生率较低，也易出现较多的畸形如大舌头、八字脚等，导致克隆动物存活率较低。

发明内容

鉴于此，有必要针对上述问题提供一种体细胞核移植胚胎的处理方法，以此来提高体细胞核移植胚胎的质量，从而提高体细胞核移植效率。

本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明提供的提高核移植胚胎体外发育效率的方法，包括：将激活后的核移植重构胚，转入BET蛋白抑制剂的胚胎培养液中培养。

进一步的，所述BET蛋白溴抑制剂在培养液中浓度为10-20nM，最佳浓度为10nM。

进一步的，所述BET蛋白抑制剂为(+)-JQ1；所述(+)-JQ1分子式：C₂₃H₂₅ClN₄O₂S，结构式为：

进一步的，所述激活后的核移植重构胚，在含BET蛋白抑制剂的PZM-3胚胎培养液中培养时间为48-72h，优选72h。

进一步的，所述重构胚在含BET蛋白抑制剂的PZM-3胚胎培养液中培养后，再换为PZM-3胚胎培养液继续培养至144-168h，优选168h。

进一步的，所述培养条件为38.5-39℃、5％O₂、5％CO₂、90％N₂和饱和湿度。

进一步的，所述核移植胚胎可以包括所有哺乳动物，包括但不局限于猪、牛、羊、鼠、人的核移植胚胎。

本发明有益效果：

BET蛋白家族具有调控体细胞定向表达的功能，克隆胚胎构建后供体细胞受卵母细胞的重编程，它的定向表达记忆“抵抗”了卵母细胞的重编程，造成克隆效率低下，重编程中一个关键事件就要擦除供体细胞的转录记忆，使其由定向表达转为多功能表达。(+)-JQ1是一种高度特异的BET蛋白抑制剂，尤其对BRD4具有高度的选择性。因此使用BET蛋白抑制剂(+)-JQ1处理克隆胚胎，抑制了BET蛋白的作用，降低了这种“抵抗”性，从而抑制了供体细胞的转录记忆，促进了核移植胚胎重编程，提高体细胞核移植胚胎的体外发育效率。

具体实施方式

为了更好的说明本发明技术方案所要解决的问题、采用的技术方案和达到的有益效果，现结合具体实施方式进一步阐述。值得说明的是，本发明技术方案包含但不限于以下实施方式。

本发明实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的或常规的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购等途径获得的常规产品。

本申请中单位“M”表示“mol/L”；“nM”表示“nmol/L”。