[发明专利]一种HPLC法分析及制备N-（对甲苯磺酰基）-L-丙氨酸及其对映异构体的方法

说明书

本发明公开了一种HPLC法分析及制备N‑(对甲苯磺酰基)‑L‑丙氨酸及其对映异构体的方法，以多糖衍生物为手性固定相，以非极性‑极性混合溶剂为流动相，采用正相色谱法分析分离。该方法能够简单、准确、高效的分析及制备单一旋光性N‑(对甲苯磺酰基)‑L‑丙氨酸及其对映异构体，从而实现对其质量控制。

技术领域

本发明涉及一种色谱分析分离方法，尤其是一种分析及制备N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸及其对映异构体的高效液相色谱法，属于化学原料制备的技术领域。

技术背景

吡咯酯(化学名：3-(N-对甲苯磺酰基-L-丙氨酰氧基)-5-苯基吡咯和吲哚酯(化学名3-(N-对甲苯磺酰基-L-丙氨酰氧基)-吲哚)是测定白细胞诊断试剂所用的常用底物，而N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸则是该底物合成过程中的关键手性中间体，因此，如何分析及制备N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸及其对映异构体，进而控制N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸的质量，显得尤为重要。N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸及其对映异构体结构如式(1)所示：

式1中，A：N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸；B：N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸；

近年来，随着手性色谱填料多样化，手性色谱柱液相色谱法应用日益广泛，然而，利用手性固定相分析及制备N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸及其对映异构体的方法未见相关报道。

因此，如何建立一种能够简单、快速、高效的分析分离N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸及其对映异构体的方法，进而实现对其质量的控制，是目前需要解决的技术问题。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术的不足，提供了一种应用手性固定相的液相色谱方法对N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸两种对映异构体进行分析分离，进而实现对其进行质量控制及单一对映体的制备。

本发明提供了一种HPLC法分析及制备N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸及其对映异构体的方法，其特征在于，采用手性色谱柱并使用正相色谱法进行分析分离；所述的手性色谱柱填料为多糖衍生物型填料，具体为硅胶表面键合直链淀粉-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)、硅胶表面涂覆直链淀粉-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)或硅胶表面涂覆纤维素-三(3,5-二甲基苯基甲酸酯)；所述的正相色谱法所用的流动相为非极性-极性混合溶剂；

所述的分析方法包括以下步骤：

(1).N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸对照品分别用乙醇溶解，配置成浓度为0.1mg/mL的对照品溶液；

(2).N-(对甲苯磺酰基)-DL-丙氨酸供试品用乙醇溶解，配制成浓度为0.1～1mg/mL的供试品溶液，进样量为5～10μL；

(3).设置流动相比例为70：30～50：50；设置流速为0.4～0.8mL/min；设置液相色谱柱温箱温度为20～40℃；检测波长为220nm；

(4).精密吸取对照品及供试品溶液分别注入液相色谱柱，参照N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸对照品保留时间，完成对N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸及其对映异构体的分析；

所述的制备方法包括以下步骤：

(1).N-(对甲苯磺酰基)-L-丙氨酸和N-(对甲苯磺酰基)-D-丙氨酸对照品分别用乙醇溶解，配置成浓度为1mg/mL的对照品溶液；

(2).N-(对甲苯磺酰基)-DL-丙氨酸供试品用乙醇溶解，配制成浓度为5～10mg/mL的供试品溶液；进样量为1-10mL；

(3).设置流动相的比例为70：30～50：50；设置流速为4～40mL/min；检测波长为220nm；