[发明专利]一种基于荧光PCR法联合检测HIV-1型及HCV的试剂盒及其制备方法和检测方法

说明书

本发明属于生物技术检测领域，具体涉及一种基于荧光PCR法联合检测HIV‑1型及HCV的试剂盒及其制备方法和检测方法。本发明应用多重PCR技术和荧光PCR技术，将两者病毒的检测整合在一个试剂盒中，可单管联合检测HIV‑1型及HCV型病毒。具有快速、特异性、灵敏度高、成本相对低等优点。另外，与当前市场上仅有的少数的同时检测两种病毒的产品相比，这类产品的灵敏度往往只能达到1x10³IU/ml，且由于引物探针过多造成非特异性扩增，出现假阳性现象，影响特异性。而本发明的产品只需要选用2对引物及2条探针，灵敏度和特异性都明显优于现有产品。

技术领域

本发明属于生物技术检测领域，具体涉及一种基于荧光PCR法联合检测HIV-1型及HCV的试剂盒及其制备方法和检测方法。

背景技术

人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)，即艾滋病(AIDS，获得性免疫缺陷综合征)病毒，是造成人类免疫系统缺陷的一种病毒。它是一种感染人类免疫系统细胞的慢病毒(lentivirus)，属逆转录病毒的一种。HIV通过破坏人体的T淋巴细胞，进而阻断细胞免疫和体液免疫过程，导致免疫系统瘫痪，从而致使各种疾病在人体内蔓延，最终导致艾滋病。由于HIV的变异极其迅速，难以生产特异性疫苗，至今无有效治疗方法，对人类健康造成极大威胁。据WHO统计，自1987年WHO宣布HIV大流行以来，HIV感染已经导致了3900万人死亡，目前为止HIV仍然是全球最大的公共卫生挑战之一，因此如何及早发现HIV病毒感染者，防止其传染给他人是艾滋病预防的一大重点方向。

目前对HIV的检测方法主要是使用血清学方法，用酶联免疫吸附实验ELISA检测病人血清中的HIV抗体进行初筛，再用免疫印迹实验进行确认。但这类血清学检测方法不适合用于抗体窗口期的感染者或是HIV阳性母亲所生婴儿的检测。而核酸检测方法，其检测靶标直接针对HIV病毒，可有效补充血清学检测窗口期检测问题，因此在临床上已将HIV核酸检测作为HIV检测的一种补充。

HIV根据血清学反应和核酸序列分为两个型：HIV-1型和HIV-2型。HIV-1型具有全球流行性，世界上绝大部分艾滋病患者都是感染了HIV-l型；而HIV-2型的感染者只集中在少数几个西非国家，其临床症状轻于HIV-1感染者，与HIV-1感染者相比平均寿命较长。因此HIV的筛查重点是HIV-1型。

丙型肝炎由丙型肝炎病毒(HCV)感染所致，主要由血液/体液传播。据世界卫生组织估计，全球有1.8亿人感染HCV。在我国健康人群抗HCV阳性率为0.7％～3.1％，约3800万人。由于病毒生物学特点和宿主免疫功能等多方面因素，机体免疫往往难以有效清除病毒，致使约50％～80％HCV感染者发展为慢性肝炎，其中20％～30％将发展成肝硬化。肝硬化患者中每年有1％～4％发展成为肝细胞癌症。未来20年内与HCV感染相关的死亡率(肝衰竭及肝细胞癌导致的死亡)将继续增加，对患者的健康和生命危害极大，已成为严重的社会和公共卫生问题。

据估计，在目前全球存活的4000万HIV/AIDS患者中，约25％～33％的病例合并感染了HCV，在美国估计约有100万的居民合并感染HIV与HCV两种病毒。由于具有共同的传播途径，HIV与HCV合并感染的可能性很大，虽然异性传播HCV的危险性很低，但是感染HIV之后HCV感染的几率明显提高，同时感染HIV也能够增加同性传播感染HCV的可能性，因此，在高危性行为人群中两者合并感染的几率很大。基于此，对于HIV和HCV的同时检测需求也越来越显得迫切。

发明内容

针对传统检测手段中所存在的问题，本发明的目的在于提供一种基于荧光PCR法联合检测HIV-1型及HCV的试剂盒及其制备方法和检测方法，可用于单管同步检测HIV-1型及HCV病毒。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明的第一方面，提供一种基于荧光PCR法联合检测HIV-1型及HCV的试剂盒，所述试剂盒中包括HIV-1检测引物及探针、HCV检测引物及探针。