[发明专利]一种砂梨叶片高效再生体系的建立方法及其应用有效
| 申请号： | 201810563170.9 | 申请日： | 2018-06-04 |
| 公开（公告）号： | CN108739385B | 公开（公告）日： | 2020-10-30 |
| 发明（设计）人： | 王利平;杨岳昆;罗慧;胡旺成;洪霓;王国平 | 申请（专利权）人： | 华中农业大学 |
| 主分类号： | A01H4/00 | 分类号： | A01H4/00 |
| 代理公司： | 武汉宇晨专利事务所 42001 | 代理人： | 江丽丽;王敏锋 |
| 地址： | 430070 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 叶片 高效 再生 体系 建立 方法 及其 应用 | ||
1.砂梨金水二号叶片高效再生体系的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）外植体材料的获得：取砂梨金水二号的带芽枝条进行消毒，无菌条件下切取带叶芽的茎尖接种于继代培养基上生长，暗培养7-10d后光照培养获得无菌的离体植株；再选取培养20-30d的未感染苹果茎沟病毒（Apple stem grooving virus）的离体植株中、上部已伸展开的叶片，无菌条件下切成小块叶片作为诱导生芽的外植体材料；
（2）分化及再生培养：将外植体叶片接种于三角瓶中的再生培养基暗处理14d-30d后再转至光下培养，产生不定芽；所述的再生培养基以NN69营养液为基础，再添加3-5mg/L 6-BA+0.1-0.2mg/L NAA +2.5g/L植物凝胶；
（3）不定芽继代培养扩繁：待不定芽长至0 .5-1.2cm，将其侧芽切下，置于继代培养基上培养获得再生苗；所述的继代培养基为MS培养基+0.2mg/L IBA+1.0mg/L 6-BA+30g/L蔗糖+5.5g/L琼脂，pH为5.8-6.0。
2.根据权利要求1所述的砂梨叶片高效再生体系的建立方法，其特征在于，步骤（1）中带芽枝条的消毒方法为：在超净工作台中用无菌水冲洗芽2-3遍，70%酒精消毒30s-1min，无菌水冲洗3-4次；0.1% HgCl2浸泡5-10min，无菌水冲洗3-4次，置无菌滤纸吸干。
3.根据权利要求1所述的砂梨叶片高效再生体系的建立方法，其特征在于，步骤（2）中再生培养基为：NN69+3mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+2.5g/L植物凝胶，pH为5.8-6.0。
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