[发明专利]一种检测艰难梭菌用培养基及其制备方法

说明书

本发明公开了一种检测艰难梭菌用培养基，其组分包括：胰酪蛋白胨2‑30g.L^‑1，月示蛋白胨1‑30g.L^‑1，酵母浸出物0.5‑20g.L^‑1，甘露醇1‑15g.L^‑1，氯化钠0.1‑10g.L^‑1，硫酸镁0.1‑5g.L^‑1，孢子诱发剂0.1‑10g.L^‑1，还原剂0.2‑10g.L^‑1，抑菌剂0.01‑1g.L^‑1，七叶苷25‑500mg.L^‑1，柠檬酸铁20‑500mg.L^‑1。本发明配制的培养基中不仅含有适于艰难梭菌菌体生长物质（蛋白胨、酵母粉等）和促孢子萌发物质（牛磺胆碱钠、甘氨酸或丙氨酸等），还添加了可耗氧还原剂，能快速耗掉培养容器和培养基中的余氧，从而为艰难梭菌生长营造一个满足要求的厌氧微环境，使其在脱离厌氧设备条件后仍可正常生长。配制的成品培养基自身具有明确的指示作用：当有艰难梭菌生长，培养基整体或部分会变黑，结果更为直观。

技术领域

本发明涉及检测用培养基，尤其是涉及一种检测艰难梭菌用培养基，本发明还涉及该培养基的制备方法。

背景技术

艰难梭菌为革兰氏阳性厌氧芽孢杆菌，可通过粪-口途径进入人体引发感染，主要产生毒素A、毒素B和二元毒素等致病因子，临床表现为腹泻、腹部痉挛、全身乏力等，严重时可导致伪膜性肠炎。健康人群肠道也常有艰难梭菌的定植，在特定条件下可大量繁殖，导致相关临床症状出现。据报道，30%的抗生素相关性腹泻，50%~70%的抗生素相关性肠炎，90%~100%的抗生素相关性假膜性肠炎均是由艰难梭菌产毒株过度繁殖并释放毒素所引起的，其感染的病死率高达17%。艰难梭菌感染具有耐药率高、复发率高、难治率高、死亡率高、医疗费用高等特点，如今艰难梭菌已经成为很多欧美国家医院感染的“超级细菌”。

对腹泻患者的粪便样本进行分离培养，将分离到的可疑艰难梭菌菌落进行鉴定和产毒素检测是大多艰难梭菌诊疗指南推荐的参考方法。艰难梭菌是一种严格厌氧细菌，必需在一个厌氧环境条件下才能生长繁殖，目前对艰难梭菌的培养均需人为的为其营造一厌氧环境来得以实现，如采用厌氧培养罐通过抽气换气获得厌氧条件，或采用商品化的厌氧盒加耗氧袋方法等。抽气换气法由于成本较低，目前使用仍旧较多，但操作繁琐，每一次培养前的抽气换气需反复3次以上才可能达到氧浓度小于0.1%，且高压惰性气瓶和厌氧罐的抽真空操作仍具一定危险性，还需要一次性购买N₂、H₂、CO₂的高压惰性气瓶、真空泵、厌氧培养罐等设备。商品化耗氧袋使用虽相对较为方便，但价格非常昂贵，培养过程中，若所用厌氧培养容器的密封出现了任何问题，都会导致整批培养检测的失败，因此还需和厌氧指示剂配套使用。CCFA平板是经典的艰难梭菌选择性培养基，除有上述不足外，还存在菌落形态不典型，需要对可疑菌落做生化或其他鉴定试验予以确认，这些缺陷大大限制了艰难梭菌培养检测技术在临床实验室的推广使用。

发明内容

本发明的目的在于针对上述现有技术存在的缺陷，提供一种在普通环境条件下即能检测艰难梭菌用的培养基，本发明还提供该培养基的制备方法。

为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案：

本发明所述的检测艰难梭菌用培养基，其组分包括：胰酪蛋白胨2-30g.L^-1，月示蛋白胨1-30g.L^-1，酵母浸出物0.5-20g.L^-1，甘露醇1-15g.L^-1，氯化钠0.1-10g.L^-1，硫酸镁0.1-5g.L^-1，孢子诱发剂0.1-10g.L^-1，还原剂0.2-10g.L^-1，抑菌剂0.01-1g.L^-1，七叶苷25-500mg.L^-1，柠檬酸铁20-500mg.L^-1。