[发明专利]一种用于消化道癌诊断、检测或筛查的引物和探针组

说明书

本发明属于生物医学领域，具体涉及一种用于消化道癌诊断、检测或筛查的引物和探针组，所述的引物包含SFRP2的正向引物和反向引物，所述的探针为SFRP2探针，SFRP2的正向引物包含SEQ ID:1‑16中的任意一条序列，SFRP2的反向引物包含SEQ ID:17‑30中的任意一条序列。相对于现有技术，本发明的有益效果是：通过提取生物样本中的DNA，采用荧光定量PCR技术，检测生物样本中是否含有甲基化的SFRP2基因，从而判断是否患有消化道肿瘤的风险；可以很好的检测到SFRP2甲基化序列，检测灵敏度可达到10拷贝/反应；甲基化的SFRP2基因可以明显区分结直肠癌、胃癌、食管癌等消化道癌症的癌症样本和正常样本。

技术领域

本发明属于生物医学领域，具体涉及一种用于消化道癌诊断、检测或筛查的引物和探针组，用于结直肠癌、食管癌及胃癌等消化道肿瘤的早期诊断/检测。

背景技术

消化道肿瘤(食管癌，胃癌和结直肠癌)是最常见的恶性肿瘤，2016年在影响因子144.8的《CA：A Cancer Journal for Clinicians》杂志上发表的2015年中国癌症统计数据显示食管癌，胃癌和结直肠癌均位列中国男性和女性癌症发病类型的前五位，且结直肠癌在过去十年中呈现出逐年上升的趋势。当前消化道癌的早期诊治比例很低，以结直肠癌为例：结直肠癌的初治分期比例为：I期占15％；II期占20％-30％；III期占30％-40％；IV期占20％-25％。在生存期方面，I期患者的5年生存率可达90％以上，而IV期患者只有略大于10％的生存率。因此，实现消化道癌的早期筛查从而达到消化道癌的早诊早治疗对于提高患者的生存率进而提升全面健康水平有着重要意义。当前消化道癌早期筛查手段主要还是内窥镜，但是由于该类方法要求专业的操作者进行操作，难以推广，同时作为一种侵入性的检查方式，患者的接受度较低，因此导致中国的消化道癌早期发现率远低于发达国家水平。

非正常DNA甲基化与很多疾病的发生和维持有着紧密联系，特别是近年来的研究成果表明DNA甲基化在癌症的诱发和维持中起着重要作用，使之成为很多癌症的很好的生物标志物。例如研究表明SFRP2等基因的甲基化与结直肠癌的发病有一定的相关性。从早期胚胎发育的角度考虑，从咽至直肠上端的绝大部分消化系统具有很高的同源性，因此消化道肿瘤的发病机理和分子表征很可能具有一定的相似之处。

发明内容

本发明针对当前消化道肿瘤早期诊断/筛查方法的缺陷，提供一种用于消化道癌诊断、检测或筛查的引物和探针组，通过提取生物样本中的DNA，采用荧光定量PCR技术，检测生物样本中是否含有甲基化的SFRP2基因，从而判断是否患有消化道肿瘤的风险。

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

一种用于消化道癌诊断、检测或筛查的引物和探针组，其特征在于，所述的引物包含SFRP2的正向引物和反向引物，所述的探针为SFRP2探针，SFRP2的正向引物包含SEQ ID:1-16中的任意一条序列，SFRP2的反向引物包含SEQ ID:17-30中的任意一条序列(表1)。

SFRP2探针包含SEQ ID：31-42中任意一条序列。

SFRP2探针标记的荧光为FAM、JOE、VIC、HEX、ROX、Texas Red，CY3,CY5，CY5.5及TAMRA中的任意一种。

检测用的DNA模板为经过亚硫酸氢盐转化后的DNA。所述的亚硫氢盐为亚硫酸氢铵、亚硫酸氢钠和无水硫酸钠中的一种或多种，亚硫酸氢盐的浓度为8～10M；亚硫酸氢盐转化过程的反应条件为：DNA模板加入到8～10M亚硫酸氢盐溶液中，70～90℃加热30～60分钟。

待检测的生物样本为血液、粪便、组织、尿液或其它可提取DNA的生物样本。

所述的引物和探针组用于荧光定量PCR，其用于检测生物样本中SFRP2甲基化，PCR反应体系为