[发明专利]一种鉴别CCoVI和CCoVII的双重纳米PCR检测方法有效

专利信息
申请号: 201810569666.7 申请日: 2018-06-05
公开(公告)号: CN108676917B 公开(公告)日: 2022-04-12
发明(设计)人: 崔尚金;秦彤 申请(专利权)人: 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
主分类号: C12Q1/70 分类号: C12Q1/70;C12Q1/686;C12R1/93
代理公司: 北京市诚辉律师事务所 11430 代理人: 梁婧文
地址: 100193 *** 国省代码: 北京;11
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摘要:
搜索关键词: 一种 鉴别 ccovi ccovii 双重 纳米 pcr 检测 方法
【权利要求书】:

1.一种非诊断目的的同时鉴别CCoVI和CCoVII的双重纳米PCR检测方法,其特征在于,

1)抽提样品RNA,并将RNA反转录为cDNA,获得扩增模板;

2)配制反应体系如下:2×nano PCR Buffer,10μL;纳米PCR引物CCoVⅠ-F、CCoVⅠ-R、CCoVⅡ-F和CCoVⅡ-R各1.0μL,引物浓度为10μM,扩增模板0.5-1μL;Taq DNA聚合酶2.5U;ddH2O加至20μL;

3)PCR反应条件为:95℃、3min;

95℃、30s,48℃、30s,72℃、30s,35个循环;

72℃、10min;

所述纳米PCR引物由以下引物组成:

扩增CCoVI特异性片段的如SEQ ID NO.1所示引物CCoVⅠ-F和如SEQ ID NO.2所示引物CCoVⅠ-R;和,

扩增CCoVII特异性片段的如SEQ ID NO.3所示引物CCoVⅡ-F和如SEQ ID NO.4所示引物CCoVⅡ-R。

2.根据权利要求1所述方法,其特征在于,还包括琼脂糖凝胶检测步骤。

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