[发明专利]一种鉴别CCoVI和CCoVII的双重纳米PCR检测方法有效
申请号: | 201810569666.7 | 申请日: | 2018-06-05 |
公开(公告)号: | CN108676917B | 公开(公告)日: | 2022-04-12 |
发明(设计)人: | 崔尚金;秦彤 | 申请(专利权)人: | 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 |
主分类号: | C12Q1/70 | 分类号: | C12Q1/70;C12Q1/686;C12R1/93 |
代理公司: | 北京市诚辉律师事务所 11430 | 代理人: | 梁婧文 |
地址: | 100193 *** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 鉴别 ccovi ccovii 双重 纳米 pcr 检测 方法 | ||
1.一种非诊断目的的同时鉴别CCoVI和CCoVII的双重纳米PCR检测方法,其特征在于,
1)抽提样品RNA,并将RNA反转录为cDNA,获得扩增模板;
2)配制反应体系如下:2×nano PCR Buffer,10μL;纳米PCR引物CCoVⅠ-F、CCoVⅠ-R、CCoVⅡ-F和CCoVⅡ-R各1.0μL,引物浓度为10μM,扩增模板0.5-1μL;Taq DNA聚合酶2.5U;ddH2O加至20μL;
3)PCR反应条件为:95℃、3min;
95℃、30s,48℃、30s,72℃、30s,35个循环;
72℃、10min;
所述纳米PCR引物由以下引物组成:
扩增CCoVI特异性片段的如SEQ ID NO.1所示引物CCoVⅠ-F和如SEQ ID NO.2所示引物CCoVⅠ-R;和,
扩增CCoVII特异性片段的如SEQ ID NO.3所示引物CCoVⅡ-F和如SEQ ID NO.4所示引物CCoVⅡ-R。
2.根据权利要求1所述方法,其特征在于,还包括琼脂糖凝胶检测步骤。
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