[发明专利]螺虫乙酯抗原及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种螺虫乙酯抗原，其特征在于，结构通式如式A所示，

所述式A中，X为CH₂、CO基团中的一种，n为0-6的整数；Protein表示载体蛋白，所述载体蛋白选自牛血清蛋白、卵清蛋白和血蓝蛋白中一种。

2.根据权利要求1所述的一种螺虫乙酯抗原的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1，将螺虫乙酯水解得到式B所示化合物；

步骤2，将式B化合物与式C所示化合物进行反应得到式D所示化合物；

Y-X-(CH₂)n-COOH

式C结构式

所述式C和式D中，X为CH₂、CO基团中的一种，Y为Cl、Br和I基团中的一种，n为0-6的整数；

步骤3，式D所示化合物和N-羟基琥珀酰亚胺在二环己基碳二亚胺或1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐存在的条件下进行偶联反应得到式E所示化合物；

所述式E中，X为CH₂、CO基团中的一种，n为0-6的整数；

步骤4，式E所示化合物与载体蛋白经偶联反应即得式A所示螺虫乙酯抗原；所述载体蛋白选自牛血清蛋白、卵清蛋白和血蓝蛋白中一种。

3.根据权利要求2所述的一种螺虫乙酯抗原的制备方法，其特征在于，步骤2中，式C所示化合物选自氯乙酸、溴乙酸、碘乙酸、氯丙酸、溴丙酸、碘丙酸、氯丁酸、溴丁酸、碘丁酸中至少一种。

4.根据权利要求2所述的一种螺虫乙酯抗原的制备方法，其特征在于，所述步骤2中，式B化合物式和C化合物的投料摩尔配比为0.1-10：1；反应的温度为0～100℃，时间为3～48小时；反应的溶剂选自吡啶、N,N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜和四氢呋喃中至少一种。

5.根据权利要求2所述的一种螺虫乙酯抗原的制备方法，其特征在于，所述步骤3中，式D所示化合物、N-羟基琥珀酰亚胺与二环己基碳二亚胺的摩尔份数比为1：1～5：1～5；

式D所示化合物、N-羟基琥珀酰亚胺与1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐的摩尔份数比为1：1～5：1～5；

所述偶联反应的温度为0～50℃，时间为4～24小时。

6.根据权利要求2所述的一种螺虫乙酯抗原的制备方法，其特征在于，步骤4中，式E所示化合物与所述载体蛋白的摩尔份数比为5～30：1；

所述偶联反应的温度为0～50℃，时间为4～36小时；所述偶联反应在pH值为5～9的条件下进行；

式E所示化合物在所述载体蛋白的溶液中进行偶联反应，所述载体蛋白的溶液是由所述载体蛋白加入至缓冲溶液中得到的，所述缓冲溶液选自碳酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液和4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液中至少一种，所述缓冲液的pH值均为7.4。

7.根据权利要求2所述的一种螺虫乙酯抗原的制备方法，其特征在于，还包括将所述偶联反应的反应体系进行透析；所述透析步骤中，所用透析液为pH值为4～10、浓度为0.01～0.2mol/L的磷酸盐缓冲溶液。

8.根据权利要求1所述的一种螺虫乙酯抗原的应用，其特征在于，用于制备检测样品中螺虫乙酯的酶联免疫试剂盒、螺虫乙酯的发光免疫试剂盒或免疫亲和色谱柱中的应用。