[发明专利]一种快速测定生物被膜中大肠杆菌对抗生素耐药性的方法在审
| 申请号： | 201810570999.1 | 申请日： | 2018-06-05 |
| 公开（公告）号： | CN108998499A | 公开（公告）日： | 2018-12-14 |
| 发明（设计）人： | 赵勇;白凤佳;张昭寰;牛丽;刘海泉 | 申请（专利权）人： | 上海海洋大学 |
| 主分类号： | C12Q1/18 | 分类号： | C12Q1/18 |
| 代理公司： | 上海唯智赢专利代理事务所(普通合伙) 31293 | 代理人： | 吴瑾瑜 |
| 地址： | 201306 上海市*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 生物被膜 大肠杆菌生物 被膜 抗生素耐药性 大肠杆菌 快速测定 抗生素 革兰氏阴性菌 生物技术领域 多粘菌素 合理用药 技术要求 配套设备 人为因素 生长阶段 体外模型 体外形成 微量接种 压力阶段 载体建立 大样本 生物膜 粘菌素 微生物 重复 恢复 研究 | ||
1.一种快速测定生物被膜中大肠杆菌对抗生素耐药性的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)生物被膜构建：
大肠杆菌培养后调节浓度至OD600＝0.45～0.5，加到微孔板内，将接种针固定在盖板上，并将盖板固定在微孔板上，使接种针插入微孔板内的菌液中，每个微孔内菌液体积为100～200μL；36～38℃、100～120rpm条件下培养18～30小时，在接种针上形成细菌生物被膜；
(2)抗生素压力测试：
配制不同浓度抗生素的药敏板，以空白菌液孔作为对照，取出步骤(1)中附有细菌生物被膜的接种针，冲洗后，压入含有不同浓度抗生素的药敏板内，36～38℃下静置培养18～30小时；
读取此过程中的光密度值，以确定生物被膜最低抑制浓度；
(3)生物被膜恢复：
取出接种针洗涤后转入含有培养基的微孔板中，低速离心或超声震荡使生物被膜剥离到培养基中；移除接种针，36～38℃下静置培养18～30小时；
读取此过程中的光密度值，以确定生物被膜最小清除浓度。
2.权利要求1所述快速测定生物被膜中大肠杆菌对抗生素耐药性的方法，其特征在于，步骤(1)的培养条件为：37℃、100～120rpm条件下培养18～30小时。
3.权利要求1所述快速测定生物被膜中大肠杆菌对抗生素耐药性的方法，其特征在于，步骤(1)中，每个微孔内菌液体积为140～160μL。
4.权利要求1或2所述快速测定生物被膜中大肠杆菌对抗生素耐药性的方法，其特征在于，步骤(1)的培养条件为：37℃、110rpm条件下培养24小时。
5.权利要求1所述快速测定生物被膜中大肠杆菌对抗生素耐药性的方法，其特征在于，步骤(2)和步骤(3)中，读取600nm波长下的光密度值。
6.权利要求1所述快速测定生物被膜中大肠杆菌对抗生素耐药性的方法，其特征在于，步骤(2)的培养条件为：37℃条件下静置培养18～30小时；步骤(3)的培养条件为：37℃条件下静置培养18～30小时。
7.权利要求1或6所述快速测定生物被膜中大肠杆菌对抗生素耐药性的方法，其特征在于，步骤(2)的培养条件为：37℃条件下静置培养24小时。
8.权利要求1所述快速测定生物被膜中大肠杆菌对抗生素耐药性的方法，其特征在于，步骤(3)的培养条件为：37℃条件下静置培养18～30小时。
9.权利要求1或8所述快速测定生物被膜中大肠杆菌对抗生素耐药性的方法，其特征在于，步骤(3)的培养条件为：37℃条件下静置培养20小时。
10.权利要求1所述快速测定生物被膜中大肠杆菌对抗生素耐药性的方法，其特征在于，所述的抗生素为多粘菌素、头孢类抗生素、碳青霉烯类抗生素或氨基糖苷类抗生素。
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