[发明专利]一种检验柠檬黄染色蒲黄的检测方法

权利要求书

1.一种检验柠檬黄染色蒲黄的检测方法，其特征是：包括以下步骤，且以下步骤顺次进行，

步骤一、取待测粉末2g，称定后加入浓度为70％的乙醇溶液20ml，超声处理20分钟，静止自然冷却，加入浓度为70％的乙醇溶液补足超声处理减失的重量，离心后取上清液作为供试品溶液；

步骤二、取对照试剂柠檬黄2g，加入浓度为70％的乙醇溶液，制备为每1ml溶液含0.5mg对照试剂的溶液，作为照品溶液；

步骤三、取供试品溶液10μl～20μl，照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，采用体积分数比为1：3：3：1：1的乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-氨水-水溶液为展开剂展开，取出晾干，观察样品色谱中，在与对照试剂色谱相对应的位置上的斑点颜色；

步骤四、斑点颜色相同，采用高效液相色谱法验证

A、对照试剂溶液的制备

称取对照试剂柠檬黄2g，加入浓度为70％的乙醇溶液，制备为每1ml溶液含25μg对照试剂的溶液，摇匀，作为对照试剂溶液；

B、样品溶液的制备

称取蒲黄药材粉末2g，加入浓度为70％的乙醇溶液20ml，超声处理20分钟，静止自然冷却，加入浓度为70％的乙醇溶液补足超声处理减失的重量，离心后取上清液作为样品溶液；

C、测定结果分析

分别取样品溶液和对照试剂溶液各10μl，注入液相色谱仪测定，测定结果中出现色谱峰与对照试剂保留时间不同，测定结束；测定结果中出现色谱峰与对照试剂保留时间相同，采用二极管阵列检测器对比相应色谱峰在200nm～600nm波长范围的紫外可见吸收光谱,光谱不同，测定结束；

步骤五、采用高效液相色谱与质谱联用进行进一步测定

选择250mm色谱柱，采用乙腈-0.02mol/L醋酸流动相系统，质谱检测结果通过吸收光谱在400nm～450nm为最大吸收峰判定。

2.根据权利要求1所述的一种检验柠檬黄染色蒲黄的检测方法，其特征是：所述步骤四中高效液相色谱法的色谱条件为十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇和0.02mol/L的乙酸铵溶液为流动相，仪器为二极管阵列检测器，检测波长为428nm。

3.根据权利要求1所述的一种检验柠檬黄染色蒲黄的检测方法，其特征是：所述步骤五中质谱检测的扫描方式为二级质谱负离子模式，雾化气为氮气，雾化气压力为35.00psi，毛细管电压为-126.2volt，干燥气温度为350℃，干燥气流速为12.00l/min，母离子扫描范围为466.7m/z，子离子扫描范围170m/z～400m/z。