[发明专利]一种快速鉴定锈斑蟳性别特异分子标记和遗传性别的方法

说明书

本发明涉及一种快速鉴定锈斑蟳性别特异分子标记和遗传性别的方法，用于锈斑蟳性别鉴定的SNP位点，所述碱基序列为：SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2，长度为368bp；所述SNP位点为：SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2中第35、89、120、218、240位。鉴定方法包括：对已知性别的锈斑蟳雌雄个体DNA提取；简化基因组文库构建及高通量测序；序列分析以及性别特异SNP位点的筛选；候选SNP位点扩大样本验证；基于性别特异SNP位点的性别特异性引物的设计；利用雄性特异性引物在特定的退火温度下对锈斑蟳的基因组DNA进行PCR扩增，并根据琼脂糖凝胶电泳检测结果进行遗传性别判定。可为锈斑蟳遗传性别的鉴定提供可靠方法，特别是发育早期阶段锈斑蟳，具有操作简便、耗时短、成本低廉、重复性好，准确率高等优点。

技术领域

本发明属于水产生物技术领域中的海洋蟹类性别鉴定技术，特别涉及一种快速鉴定锈斑蟳性别特异分子标记和遗传性别的方法。

背景技术

SNP(Single Nucleotide Polymorphism)，是指在基因组上单个核苷酸的变异，包括转换、颠换、缺失和插入，形成的遗传标记，其数量很多，多态性丰富。SNP作为第三代遗传分子标记,目前已经在很多物种的遗传多样性分析、基因作图、分子标记辅助育种和功能基因组学的研究中得到了广泛的应用。

锈斑蟳(Charybdis feriatus)俗称红花蟹，隶属于甲壳动物纲(Crustacea)，十足目(Decapoda)，梭子蟹科(Portunidae)，蟳属(Charybdis)，主要分布于太平洋以及印度洋的热带、亚热带和温带沿岸，是西太平洋-印度洋最适合养殖的四大经济蟹类之一。锈斑蟳在我国广东、广西、福建、台湾等地均有分布。

锈斑蟳个体大、肉质鲜美、颜色红艳喜庆,深受市场欢迎。随着经济的发展和生活水平的提高，人们对锈斑蟳的需求也不断增加。由于其生长速度快、体型大、风味好、市场需求高，是最有价值的渔业资源之一，已成为水产养殖和驯化的潜在重要目标。野生雌性锈斑蟳的体重通常为200-350克，但雄性锈斑蟳的体重可达1公斤。因此，本研究的开展有助于进行锈斑蟳人工繁育研究及锈斑蟳单性育种和养殖技术的发展，有助于提高其养殖产量，创造更高的经济价值，推动锈斑蟳资源科学保护、开发与利用，促进锈斑蟳养殖业的发展。

目前国内外有关锈斑蟳的报道涉及渔业生物调查、分布生物学特征、生态学食物组成、肉质营养评价、病害与毒理学、胚胎发育、亲蟹培育、人工育苗技术、微卫星分子标记等各个方面。但是由于目前通过简化基因组测序筛选多态性遗传标记的技术手段应用还不够广泛，没有结合分子方法用于鉴定锈斑蟳性别，现在生产实践或学术研究中都只能通过形态学方法鉴定锈斑蟳的性别，鉴定准确性低，而且难以鉴定处于生长发育早期的锈斑蟳的性别，目前还未见与锈斑蟳性别连锁标记以及遗传性别鉴定方法的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种快速鉴定锈斑蟳性别特异分子标记和遗传性别的方法，以快速鉴定锈斑蟳的性别特异分子标记，并快速鉴定遗传性别，特别是处于生长发育早期的锈斑蟳的性别。

一种用于锈斑蟳性别鉴定的SNP位点，所述碱基序列为：SEQIDNO：1或SEQIDNO：2，长度为368bp；所述SNP位点为：SEQIDNO：1或SEQIDNO：2中第35、89、120、218、240位。

一种快速鉴定锈斑蟳性别特异分子标记和遗传性别的方法，主要包括以下步骤：

(1)对已知性别的锈斑蟳雌雄个体DNA提取；

(2)简化基因组文库构建及高通量测序；

(3)序列分析以及性别特异SNP位点的筛选；

(4)候选SNP位点扩大样本验证；

(5)基于性别特异SNP位点的性别特异性引物的设计；