[发明专利]抗人bFGF纳米抗体在制备治疗黑色素瘤药物中的应用

说明书

本发明公开了抗人bFGF纳米抗体在制备治疗黑色素瘤药物中的应用。所述的抗重组人bFGF的纳米抗体具有分子量小、特异性强、亲和力高、耐高温等优点；同时，所需剂量低，对黑色素瘤细胞的增殖具有明显的抑制作用，并可抑制黑色素瘤细胞的生长及迁移。所述的抗人bFGF纳米抗体的制备方法简单，纯化后的纯度可达到90％以上。本发明为bFGF相关肿瘤疾病的治疗提供新的候选药物，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别涉及抗人bFGF纳米抗体在制备治疗黑色素瘤药物中的应用。

背景技术

黑色素瘤是一种恶性程度高的肿瘤，发展迅速，死亡率高，对放疗和化疗均不敏感，除早期原位黑色素瘤可通过外科手术切除，晚期发生转移的黑色素瘤则难以治愈。在一组恶性黑色素瘤细胞系中，研究人员发现每个细胞系都独特的表达bFGF(碱性成纤维细胞生长因子)、PDGF-A、PDGF-B、TGF-β、TGF-α中两种，或者四种、五种细胞因子，但是所有的细胞系都表达bFGF，说明bFGF在黑色素瘤细胞中的表达具有普遍性。从正常上皮非典型性增生，到原位癌早期浸润癌再到已发生转移的恶性黑色素瘤，bFGF在细胞中的表达强度依次升高。研究发现，利用反义核苷酸技术和过量表达突变的FGFR1(FGFR：成纤维细胞生长因子受体)来干扰bFGF通路，能够抑制黑色素瘤细胞的增殖和体内的肿瘤发生，进而说明bFGF是促进黑色素瘤发生和发展的重要影响因子。bFGF/FGFR作为抗肿瘤治疗的靶点之一，目前尚未有商品化的治疗性bFGF抗体，bFGF靶向药物的研发仍有广阔空间。

bFGF单抗的抑制肿瘤血管新生和抗肿瘤的作用已经得到了国内外学者的证实和肯定。1987年Massoglia等开创了bFGF单抗研究的先河，1989年Reilly等首次制备出具有中和活性的bFGF单抗，1991年Akira Hori等首次报道bFGF单抗能在特定的条件下抑制肿瘤的生长，1999年Anouma认识到其具有体内外抑瘤活性。国内bFGF单抗的研究始于1998年，向军俭等制备的bFGF单抗能促进细胞增殖，2010年又报道所制备的鼠源性bFGF单抗具有抑制HUVEC血管新生的作用，并且人源性bFGF单抗具有抑制血管新生的作用。虽然目前已有抗bFGF传统抗体和Fab抗体等小分子抗体的相关研究文献和专利报道，但这些报道中所制备的抗体均来自小鼠或兔，为经典的含有重链和轻链的IgG类抗体及其衍生物，没有来自骆驼科动物、只有重链的新型抗体(也就是纳米抗体)的相关研究报道。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种抗重组人bFGF的纳米抗体在制备治疗黑色素瘤药物中的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种抗重组人bFGF的纳米抗体在制备治疗黑色素瘤药物中的应用；所述的抗重组人bFGF的纳米抗体包含由框架区FR(Framework Region)和互补决定区CDR(Complementarity-determining Regions)组成的可变区结构域，所述的可变区结构域包含选自以下的CDR1、CDR2和CDR3：

(1)SEQ ID No.1～4任一氨基酸序列所示的CDR1，

(2)SEQ ID No.5～8任一氨基酸序列所示的CDR2；

(3)SEQ ID No.9～12任一氨基酸序列所示的CDR3。

所述的可变区结构域包含选自以下任一项的CDR1、CDR2和CDR3：

(1)SEQ ID No.1所示的CDR1，SEQ ID No.5所示的CDR2和SEQ ID No.9所示的CDR3；

(2)SEQ ID No.2所示的CDR1，SEQ ID No.5或SEQ ID No.6所示的CDR2，和SEQ IDNo.9或SEQ ID No.10所示的CDR3；