[发明专利]一种双核铀酰配合物在ATP分析中的应用

说明书

本发明公开了一种双核铀酰配合物在ATP分析中的应用，属于生物化学分析检测方法技术领域。包括以下步骤：确定检测ATP的最优条件；配制BUIPTP检测底液；绘制测定ATP的标准曲线；样品中ATP含量的分析：称取含有ATP的待测样品，加水溶解或稀释，并加入Tris‑HCl缓冲液；在搅拌下将BUIPTP检测底液滴加到上述溶液中；在最佳波长处测定二级散射光谱强度。利用本发明所提供的检测方法检测的ATP的浓度，与客观浓度的偏差小于2.5％，本发明所提出的检测方法具有很高的精准度；在ATP的浓度低至0.75nmol·L^‑1时本发明仍能检出，在2.5‑500nmol·L^‑1范围内具有良好的检测效果。

技术领域

本发明涉及生物化学分析检测方法技术领域，具体涉及一种双核铀酰配合物在ATP分析中的应用。

背景技术

三磷酸腺苷(Adenosine triphosphate，ATP)是一种高能化合物，是生物体内组织细胞一切生命活动所需能量的直接来源，能够储存和传递化学能，参与体内蛋白质、脂肪、糖和核酸的代谢。ATP在细胞的各种生理、病理过程中起着重要作用，可以作为细胞活性的一个重要标志物。ATP也常作为检测微生物污染的一个指标。

目前已有的ATP检测方法大抵操作繁琐，耗时长，制备过程复杂，对仪器设备要求高，精度低等缺点。因此，探索新的、灵敏度高的、快速便捷的检测方法对于检测ATP在食品、药品、环境水样中的微生物污染情况等具有十分重要的意义。

发明内容

在光谱分析检测方法中，二级散射(second-order scattering,SOS)是一种新发展起来的分析技术，因其灵敏度高，简单便捷的优点引起人们的关注，已被用于各种目标分析物的检测。与其他分析法相比较，SOS法线性关系好，线性范围宽，是一种新的光谱分析检测方法。我们在研究中发现，在中性条件下，双核铀酰配合物(binuclear uranyl-isophthalaldehyde-tetrapyrrole,BUIPTP)与ATP能形成一种配合物体系，对体系进行光谱性能测试，发现在体系激发波长的二倍处出现一个强峰，激发波长位于283nm处，在最大激发波长处，体系的SOS强度随着ATP的浓度的增加存在着线性关系，可用于痕量分析，且该方法具有较高的灵敏度，检出限为0.75nmol·L^-1，其灵敏度较常见的检测ATP的方法要大大的提高。本发明研究了双核铀酰配合物(BUIPTP)与ATP的配位反应对二级散射强度的影响，并对反应条件进行一系列的优化，得出的结果让人满意。

本发明提供一种双核铀酰配合物在ATP分析中的应用，就是创造性地利用双核铀酰配合物用于二级散射方法，以可以解决现有技术中的上述问题。

本发明提供了一种双核铀酰配合物在ATP分析中的应用，所述双核铀酰配合物为BUIPTP，该应用包括以下步骤：

步骤1，确定检测ATP的最优条件：

1-1，在比色管中加入已知浓度的ATP溶液得到待测ATP溶液；

1-2，配制BUIPTP检测底液；

1-3，配制标准品溶液：

在搅拌下将BUIPTP检测底液滴加到待测ATP溶液中，得到ATP标准溶液；

1-4，用荧光分光光度计测定不同激发波长下ATP标准溶液二级散射光谱强度，确定检测ATP的最佳波长；

1-5，配制不同pH的缓冲溶液，将不同pH的缓冲溶液加入ATP标准溶液中，在最佳波长下测定体系二级散射光谱，确定检测ATP的最佳pH；

1-6，将ATP标准溶液孵育0-50min，在最佳波长及pH条件下测定二级散射光谱，确定检测ATP的最佳孵育时间；

1-7，在最优条件下，检测不同浓度的ATP的二级散射光谱；