[发明专利]苯硼酸修饰的近红外方酸染料及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种用于ATP检测的苯硼酸修饰的近红外方酸染料，其特征在于：其结构式如下：

，其中，R选自o-B(OH)₂、m-B(OH)₂或ρ-B(OH)₂。

2.一种制备如权利要求1所述的近红外方酸染料的方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）将吲哚修饰的苯硼酸衍生物和二氰基乙烯基方酸衍生物混合，溶于溶剂，N₂保护下回流；

（2）冷却至室温，减压除去溶剂，得粗产品；

（3）经硅胶柱层析纯化，得到所述的近红外方酸染料；

其中，所述溶剂由正丁醇和甲苯按体积比1:1组成；

所述回流的时间为5小时；

所述硅胶柱层析采用体积比为15:1的二氯甲烷和甲醇的混合溶液作为洗脱剂。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述吲哚修饰的苯硼酸衍生物的合成方法包括如下步骤：

a）将2,3,3-三甲基吲哚和溴甲基苯硼酸混合，溶于溶剂，N₂保护下回流分水；

b）冷却至室温，减压除去溶剂，得粗产品；

c）粗产品经硅胶柱层析纯化，得到所述吲哚修饰的苯硼酸衍生物；

其中，步骤a）所用溶剂为乙腈；所述回流的时间为24小时；

步骤c）所述硅胶柱层析采用体积比为20:1的二氯甲烷和甲醇的混合溶液为洗脱剂。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述2,3,3-三甲基吲哚的合成方法包括如下步骤：

i）将苯肼与甲基异丙基酮溶于溶剂，再滴入浓硫酸加热回流；

ii）冷却至室温，滴加NaOH溶液调至碱性后，用二氯甲烷萃取，减压除去溶剂；

iii）经硅胶柱层析纯化，得到所述2,3,3-三甲基吲哚；

其中，步骤i）中所用溶剂为无水乙醇；所述回流的温度为80℃，时间为3小时；

步骤ii）中加NaOH溶液调至pH为8；

步骤iii）中所述硅胶柱层析采用体积比为3:1的石油醚和乙酸乙酯的混合溶液作为洗脱剂。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述二氰基乙烯基方酸衍生物的合成方法包括如下步骤：

a）将丙二腈、和三乙胺溶于溶剂，室温搅拌反应；

b）反应完成后，将反应瓶置于冰箱冷却，然后用二氯甲烷萃取，减压除去溶剂，得所述二氰基乙烯基方酸衍生物；

其中，步骤a）中所用溶剂为苯；搅拌反应时间为6小时；

步骤b）中冷却的时间为24小时。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于：所述的合成方法包括如下步骤：

i）将方酸溶于溶剂中，加热回流反应后旋蒸除去溶剂；

ii）重复步骤i）三次之后再长时回流反应一次；

iii）所得产物经硅胶柱层析纯化，得到所述；

其中，步骤i）所用溶剂为乙醇，回流温度为80℃，反应时间为3小时；

步骤ii）长时回流反应的温度为80℃，时间为24小时；

步骤iii）中所述硅胶柱层析采用体积比为2:1的石油醚和乙酸乙酯的混合溶液作为洗脱剂。

7.一种如权利要求1所述的近红外方酸染料在ATP检测中的应用，其特征在于：将所述苯硼酸修饰的近红外方酸染料制成荧光响应的ATP探针，用于细胞内ATP的荧光成像检测。