[发明专利]一种检测斑点叉尾鮰HSP4基因隐性致白化突变的方法

说明书

本发明提供了一种检测斑点叉尾鮰HSP4基因隐性致白化突变的方法。本发明方法采用一对特异引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，对斑点叉尾鮰HSP4基因进行PCR扩增，扩增产物进行凝胶电泳，依据电泳图谱中出现的条带数及大小判定基因分型的结果。白化个体有99bp的碱基缺失，只有一条较小的150bp条带；正常个体HSP4基因没有变化，只有一条较大的249bp条带；隐性致白化突变携带者个体该基因单链缺乏99bp，导致同时存在150bp和249bp一大一小两条带。本发明能够快速、准确地检测HSP4基因隐性致白化突变携带者的个体，在斑点叉尾鮰育种过程中具有重要应用价值。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，具体涉及一种检测斑点叉尾鮰HSP4基因隐性致白化突变的方法。

背景技术

斑点叉尾鮰(Ictalures punctatus)原产于美国，是目前美国养殖技术最为成熟、养殖产量最高的种类，养殖产量约30万吨。斑点叉尾鮰自20世纪80年代引入我国后，在短短的二十几年时间里得到了快速发展，相继突破了养殖、繁殖、饲料、加工出口等环节技术难关，形成了从苗种繁育、养殖、加工、市场营销完整的产业链条，年产量超过20万吨，成为我国出口美国的主要品种之一。

白化病是由于动物眼睛和皮肤中的黑色素细胞缺乏或黑色素生成发生障碍导致的一种体色异常病。在各种脊椎动物，包括哺乳动物、两栖类、鱼类和鸟类中都发现了白化个体。由于缺乏保护色，容易被天敌捕食，因此白化个体在自然环境中生存能力较低，野生白化个体比较少见。之前的研究表明，鱼类的白化大都由不同基因的隐性突变导致。如，Oca2基因的隐性突变导致斑马鱼和洞穴鱼类的白化，Mc1r基因的隐性突变导致洞穴鱼类的白化。

斑点叉尾鮰在人工繁育过程中，也会获得部分白化个体。测交繁殖试验表明，斑点叉尾鮰白化也是隐性突变所致，即，白化斑点叉尾鮰个体为隐性纯合。但是具体突变基因仍然未知。而目前国内市场对于白化斑点叉尾鮰有一定的需求，白化个体的售价也高于普通个体。因此，建立一种可以快速鉴别斑点叉尾鮰隐性白化突变个体的方法，对于生产白化斑点叉尾鮰个体具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的上述不足，提供一种检测斑点叉尾鮰HSP4基因隐性致白化突变的方法。

一种用于检测斑点叉尾鮰HSP4基因隐性致白化突变的引物，上游引物为SEQ IDNO.1，下游引物为SEQ ID NO.2。

本发明所述的引物在检测斑点叉尾鮰HSP4基因隐性致白化突变种的应用。

一种检测斑点叉尾鮰HSP4基因隐性致白化突变的方法，包含以下步骤：

(1)提取待鉴定的斑点叉尾鮰基因组DNA；

(2)以提取的基因组DNA为模板，PCR扩增斑点叉尾鮰HSP4基因；

(3)扩增产物进行直接电泳，根据电泳图谱结果，进行判定：白化个体有99bp的碱基缺失，只有一条150bp条带；正常个体HSP4基因没有变化，只有一条249bp条带；隐性致白化突变携带者个体该基因单链缺乏99bp，导致同时存在150bp和249bp一大一小两条带；或者

(3)扩增产物纯化后，直接测序，根据测序结果，进行判定：白化个体有99bp的碱基缺失，序列长度为150bp，正常个体序列长度为249bp，隐性致白化突变携带者个体该基因单链缺乏99bp，导致峰形图存在重叠峰。所述的用于PCR扩增斑点叉尾鮰HSP4基因的上游引物为SEQ ID NO.1，下游引物为SEQ ID NO.2。