[发明专利]一种静注人免疫球蛋白的提纯方法在审
| 申请号： | 201810576441.4 | 申请日： | 2018-06-06 |
| 公开（公告）号： | CN108623677A | 公开（公告）日： | 2018-10-09 |
| 发明（设计）人： | 刘余江;滕世超;杨柳;周康森;张宝献;李长明 | 申请（专利权）人： | 华兰生物工程重庆有限公司;华兰生物工程股份有限公司 |
| 主分类号： | C07K16/00 | 分类号： | C07K16/00;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/18 |
| 代理公司： | 重庆中之信知识产权代理事务所(普通合伙) 50213 | 代理人： | 张景根 |
| 地址： | 408000 *** | 国省代码： | 重庆;50 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 层析 人免疫球蛋白 提纯 过滤液 二次沉淀 滤膜过滤 溶解液 凝胶 过滤 溶解 阴离子交换凝胶 电导率 凝胶层析 线性流速 注射用水 收集层 可控 平衡 上样 冲洗 蛋白 | ||
1.一种静注人免疫球蛋白的提纯方法，对经低温乙醇法得到的二次沉淀组分进行提纯，其特征在于：所述静注人免疫球蛋白的提纯方法包括如下步骤：
S1溶解：用相当于二次沉淀组分体积5～10倍的注射用水溶解二次沉淀组分，并在2.0～8.0℃下搅拌2～4小时，得溶解液；
S2过滤：过滤溶解液，先用0.45μm孔径过滤，再用0.2μm孔径过滤，得过滤液；
S3调整过滤液：调整过滤液的pH为5.60～6.00，蛋白浓度为10～13g/L，电导率为0.20～1.90ms/cm，得层析前溶液；
S4层析：利用强阴离子交换凝胶进行层析，层析前，先对凝胶进行冲洗平衡：平衡至凝胶的pH与层析前溶液的pH值差值为-0.10～0.10；
依据层析前溶液的蛋白浓度，按照层析载量不高于600g/L凝胶层析上样，控制流速为0.5～1.5cm/min线性流速，并收集层析后溶液，
层析结束后，用洗脱液将吸附于凝胶上的杂质冲洗下来，得杂质溶液。
2.根据权利要求1所述的一种静注人免疫球蛋白的提纯方法，其特征在于：所述步骤S2中的过滤压力不超过0.15MPa。
3.根据权利要求1所述的一种静注人免疫球蛋白的提纯方法，其特征在于：所述步骤S3调整过滤液的pH用1.0mol/L醋酸溶液，并控制醋酸加入的速度在300～400ml/min。
4.根据权利要求1所述的一种静注人免疫球蛋白的提纯方法，其特征在于：所述步骤S3中用平衡液调整过滤液蛋白浓度、电导率，所述平衡液包括pH为5.60～6.00的0.025mol/L醋酸盐缓冲液、pH为5.60～6.00的0.0025mol/L醋酸盐缓冲液、注射用水其中一种或多种组合。
5.根据权利要求1所述的一种静注人免疫球蛋白的提纯方法，其特征在于：所述步骤S4层析前对凝胶进行平衡包括如下步骤：按1.5～3.0cm/min的线性流速分别用0.5mol/L氢氧化钠溶液、pH为5.60～6.00的0.025mol/L醋酸盐缓冲液、pH为5.60～6.00的0.0025mol/L醋酸盐缓冲液进行冲洗平衡。
6.根据权利要求1所述的一种静注人免疫球蛋白的提纯方法，其特征在于：步骤S1中所述注射用水的温度为2～8℃，且注射用水用于溶解二次沉淀组分前检查内毒素，内毒素检查合格后再使用。
7.根据权利要求1所述的一种静注人免疫球蛋白的提纯方法，其特征在于：对溶解液、过滤液、层析后溶液进行取样测量蛋白质浓度、pH、电导率，用以指导下一步的操作。
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