[发明专利]一种静注人免疫球蛋白的提纯方法

说明书

本发明公开了一种静注人免疫球蛋白的提纯方法，对二次沉淀组分进行提纯，其特征在于：所述静注人免疫球蛋白的提纯方法包括如下步骤：S1溶解：用注射用水溶解二次沉淀组分，并在2.0～8.0℃下搅拌2～4小时，得溶解液；S2过滤：过滤溶解液，先用0.45μm滤膜过滤，再用0.2μm滤膜过滤，得过滤液；S3调整过滤液：调整过滤液的pH为5.60～6.00，蛋白浓度为10～13g/L，电导率为0.2～1.90ms/cm，得层析前溶液；S4层析：利用强阴离子交换凝胶进行层析，层析前，先对凝胶进行冲洗平衡：平衡至凝胶的pH与层析前溶液的pH值差值为‑0.10～0.10，按照0.5～1.5cm/min线性流速，按照层析载量不高于600g/L凝胶层析上样，并收集层析后溶液。本发明的方法简单、可控，大大降低了静注人免疫球蛋白中IgA、IgM的含量。

技术领域

本发明涉及生物制药领域，具体涉及一种静注人免疫球蛋白的提纯方法。

背景技术

静注人免疫球蛋白的活性成分为人免疫球蛋白，以1000人份以上的健康人血浆为原料，分离制备得到IgG免疫球蛋白。静注人免疫球蛋白含有广谱抗病毒、细菌或其它病原体的IgG抗体，另外免疫球蛋白的独特型和独特型抗体能形成复杂的免疫网络，所以具有免疫替代和免疫调节的双重治疗作用，临床上主要用于原发性免疫球蛋白缺乏症、继发性免疫球蛋白缺陷病、自身免疫性疾病。

提取人免疫球蛋白的技术主要是低温乙醇法，低温乙醇法始于20世纪40年代。但是低温乙醇分离蛋白质的方法制得的免疫球蛋白不能用于静脉注射，否则会引起严重的副反应，这是因为，除了体内缺乏IgG外，另外一个重要的原因是制剂中存在着与IgG聚合体相关的抗补体活性。为了治疗像原发性免疫缺陷、免疫性血小板缺乏性紫癜和皮肤黏膜淋巴结综合征等需要注射大剂量的免疫球蛋白的疾病，人们的研究重点放在如何减少抗补体活性上。主要的方法包括酶解法和化学修饰法，在消除和减少抗补体活性的同时，也影响到了IgG的全活性表达。如IgG上Fc段的功能与效应。经过多次的改进，现在的制备技术主要有低温乙醇法结合层析法。低温乙醇法以人血浆为原料，一般经过二次沉淀，得到免疫球蛋白的二次沉淀组分，二次沉淀组分中包括大部分的IgG、少量的IgA、IgM、还带有多聚体和PKA。

近年来，国内生产厂家将重点放在目标产物的收率上，不断改善静注人免疫球蛋白的制备工艺。但是人血中的免疫球蛋白主要有五种，每一种还包括多种亚种，其中IgA能够引起先天缺乏IgA患者输注静注人免疫球球蛋白后产生抗-IgA，可能引起过敏反应，产生副作用，成为一个不安全因素。欧洲规定了必须标明IgA的含量，以便患者选择IgA含量较低的产品，而国内并没有要求。国内有IgA的含量不超过200μg/ml的报道，国外出现过IgA的含量不超过50μg/ml的要求。为了降低静注人免疫球蛋白中IgA、IgM的含量，现提供一种静注免疫球蛋白提纯的方法，简化工艺，大大降低静注人免疫球蛋白中IgA、IgM的含量。

发明内容

针对现有技术中所存在的不足，本发明的目的在于提供一种静注人免疫球蛋白的提纯方法，本发明的方法简单、可控，大大降低了静注人免疫球蛋白中IgA、IgM的含量。

为实现上述目的，本发明采用了如下的技术方案：

一种静注人免疫球蛋白的提纯方法，对经低温乙醇法得到的二次沉淀组分进行提纯，所述静注人免疫球蛋白的提纯方法包括如下步骤：

S1溶解：用相当于二次沉淀组分体积5～10倍的注射用水溶解二次沉淀组分，并在2.0～8.0℃下搅拌2～4小时，得溶解液；

S2过滤：过滤溶解液，先用0.45μm滤膜过滤，再用0.2μm滤膜过滤，得过滤液；

S3调整过滤液：调整过滤液的pH为5.60～6.00，蛋白浓度为10～13g/L，电导率为0.20～1.90ms/cm，得层析前溶液；