[发明专利]分离的植物防御素多肽及其制备方法和用途

说明书

本发明提供了分离的植物防御素多肽及其制备方法和用途。其中，该分离的植物防御素多肽具有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。本发明的分离的植物防御素多肽能够有效抑制脑癌细胞生长，进而能够预防或治疗脑癌。

技术领域

本发明涉及生物制药领域，具体地，涉及分离的植物防御素多肽及其制备方法和用途，更具体地，涉及分离的植物防御素多肽及其制备方法、分离的寡核苷酸、构建体、重组细胞、分离的植物防御素多肽在制备药物中的用途及药物。

背景技术

防御素是存在于动植物体内、富含半胱氨酸的阳离子小蛋白或多肽。作为动植物体内具有防御和保护功能的多肽，防御素具有广谱抗细菌、抗真菌和杀死很多带囊膜和不带囊膜病毒的生物学功能。防御素一般是由18-50个氨基酸组成，含有6-8个保守的半胱氨酸，形成3-4个二硫键，并具有一定化学稳定性结构的多肽物质。

研究发现，动植物的免疫细胞，如粒细胞和所有的上皮细胞，具有多种可以帮助杀死病原微生物的防御素存在，其作用机理首先是利用防御素的阳离子与细胞膜上负电荷相互作用而附着于细菌膜表面、通过与细胞膜脂质双层中蛋白间的相互作用、嵌入到细菌细胞膜中、形成离子通道或特殊的孔道，破坏其完整性并造成穿孔和细胞内离子和营养物溢出胞外而导致细菌的死亡。

目前，从动植物分离到的防御素种类多，分布广泛，从植物、昆虫、软体动物、甲壳动物、两栖动物、鱼类、鸟类及哺乳动物等生物均有发现。对不同来源防御素的作用范围，尚未有系统和深入的研究。特别是植物防御素在抗肿瘤药物方面的研究很少，尤其是在人类癌症药物的研究上，几乎还是空白。

因而，关于植物防御素的研究仍有待深入。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出一种能够有效抑制肿瘤细胞增殖的手段。

在本发明的第一方面，本发明提供了一种分离的植物防御素多肽。根据本发明的实施例，该分离的植物防御素多肽具有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。发明人发现，本发明的分离的植物防御素多肽能够有效抑制脑癌细胞生长，进而能够预防或治疗脑癌。

在本发明的第二方面，本发明提供了一种分离的寡核苷酸。根据本发明的实施例，该分离的寡核苷酸具有SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列。根据本发明的实施例，所述分离的寡核苷酸编码前面所述的分离的植物防御素多肽。

在本发明的第三方面，本发明提供了一种从植物浆果中分离获得前面所述的分离的植物防御素多肽的方法。根据本发明的实施例，该方法包括：(1)将所述植物浆果预冷后粉碎，然后进行酒精浸泡处理；(2)将经过酒精浸泡处理的果仁依次进行第一过滤、酒精浸洗和干燥处理，以便获得干燥的浆果粉末；(3)将所述干燥的浆果粉末依次进行硫酸浸泡处理和第一离心处理，以便收获上清液；(4)将所述上清液依次进行MES缓冲液调节、第二离心和第二过滤处理，以便获得离子交换层析样品；以及(5)将所述离子交换层析样品进行离子交换柱层析分离，以便获得所述分离的植物防御素多肽。发明人发现，利用本发明的该方法，能够快速有效地获得前面所述的分离的植物防御素多肽，且方法简单，操作方便，对设备无特殊要求，易于实现，并且获得的多肽纯度较高，能够有效用于预防或治疗脑癌。

根据本发明的一个实施例，所述方法包括：(1)将所述羞木树浆果预冷后粉碎，并用100％酒精中浸泡4小时；(2)将经过酒精浸泡处理的果仁依次进行第一过滤、100％酒精浸洗和干燥处理，以便获得干燥的浆果粉末；(3)利用0.05M的硫酸浸泡所述干燥的浆果粉末2小时，离心、收获上清液；(4)利用MES缓冲液调节所述上清液至20mM，并于13500rpm下进行第二离心30分钟后，利用0.45μm滤膜进行第二过滤处理，以便获得离子交换层析样品；以及(5)将所述离子交换层析样品进行离子交换柱层析分离，以便获得所述分离的植物防御素多肽。由此，能够有效获得前面所述的分离的植物防御素多肽，且获得的多肽品质良好，产率较高。