[发明专利]一种慢性肾小球疾病肾小球硬化标志物及其检测试剂盒

权利要求书

1.一种慢性肾小球疾病肾小球硬化标志物，其特征在于，所述标志物为尿液中足细胞微粒。

2.根据权利要求1所述的慢性肾小球疾病肾小球硬化标志物，其特征在于，所述足细胞微粒为足细胞在激活或发生凋亡时细胞膜出芽释放的直径在100-1000nm大小的双层膜囊泡状结构，而非外泌体。

3.根据权利要求1所述的慢性肾小球疾病肾小球硬化标志物，其特征在于，所述标志物优选能够携带足细胞特异性膜蛋白podocalyxin。

4.一种用于检测权利要求1所述的慢性肾小球疾病肾小球硬化标志物的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括能够与所述标志物中的podocalyxin蛋白发生特异性结合的流式荧光抗体和与磷脂酰丝氨酸特异性结合的流式荧光抗体，以及能够用于检测所述足细胞微粒的试剂。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括蛋白酶抑制剂，annexinV缓冲液，0.8μm标准微球，3μm标准微球，APC标记的能与磷脂酰丝氨酸特异性结合的annexin-V流式荧光抗体，PE标记的能podocalyxin蛋白发生特异性结合podocalyxin流式荧光抗体。

6.一种权利要求1所述的慢性肾小球疾病肾小球硬化标志物在制备分离和检测尿液中足细胞微粒的试剂盒中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，包括如下步骤：

(1)收集尿液，低速离心，保留上清液，加入蛋白酶抑制剂；

(2)低速离心留取上清液，再高速离心获得微粒沉淀，利用annexin V缓冲液重悬微粒沉淀；

(3)利用0.8μm标准微球和3μm标准微球作为流式细胞仪检测过程中的定量和定位参照，并采用APC标记的annexin-V流式抗体，PE标记的podocalyxin流式抗体标记足细胞微粒；

(4)通过流式细胞仪检测尿液中足细胞微粒绝对数量。