[发明专利]一种慢性肾小球疾病肾小球硬化标志物及其检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种慢性肾小球疾病肾小球硬化标志物及其检测试剂盒，所述标志物为尿液中足细胞微粒。本发明的足细胞微粒具有特定双层膜结构的细胞外囊泡，利用流式细胞仪的方法鉴定慢性肾小球疾病患者尿液中足细胞微粒，并通过进一步的试验发现尿液中足细胞微粒在慢性肾小球疾病患者甚至在不同程度的肾小球硬化中差异表达，检测待测样本中尿液中足细胞微粒数量，能够判断或者辅助判断慢性肾小球疾病肾小球硬化的发生和/或发展，确定尿液中足细胞微粒能够作为慢性肾小球疾病肾小球硬化筛查或者辅助筛查诊断的标志物。同时本发明的检测试剂盒配合流式细胞仪可以有效检测尿液中足细胞微粒的释放水平。

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，具体涉及一种慢性肾小球疾病肾小球硬化标志物及其检测试剂盒。

背景技术

肾脏病的诊断金标准是“肾穿刺活检术”取得肾脏组织行病理检查，但该检查属于有创操作并在临床工作上难以重复。尿液中含有丰富的生物学信息，包括蛋白，mRNA等，整个尿路系统的病理生理改变均会导致尿液中成分改变，因此尿液是获取泌尿系统中各种细胞生物学状态的重要窗口，也可辅助监测疾病的进展和治疗效果。微粒是一种直径在100-1000nm的由细胞激活或凋亡产生的细胞外囊泡，主要是由于细胞膜出泡形式而产生，因此携带有母本细胞的细胞膜蛋白和mRNA等遗传学信息。微粒还能表征母本细胞的损伤情况。

足细胞是肾脏细胞的一种，也是肾脏中滤过屏障的重要组成部分，但其几乎无再生能力，许多免疫因素和糖尿病等代谢性因素均容易导致足细胞损伤，因此筛查和监测足细胞损伤和肾小球硬化的程度，特别是早期筛查和辅助诊断，有利于慢性肾小球疾病患者肾小球硬化的尽早发现以及跟踪判断，能够早期进行药物干预延缓肾脏病的进展，意义重大。

CKD早期起病隐匿、不易发现，目前临床上主要以尿微量白蛋白排泄率(urinaryalbumin excretion rate，UAER)作为判断CKD进展的检测指标，然而该指标存在一定的局限性，譬如，CKD初期尽管病变在进展，但UAER尚在正常范围内，无法进行监测，并且检测结果与临床实际情况有时也存在一定的偏差。而通过检测肌酐估算的肾小球滤过率(estimated glomerular filtration rate，eGFR)存在一定的滞后性，血清肌酐清除率下降的时间迟于肾脏本身的病变发生和进展的时间。肾活检是诊断CKD肾脏病理变化的“金标准”，但该检查具有一定的创伤性，临床难以反复进行。因此，寻找早期、无创、精准反映CKD进展的生物标志物已成为当前肾脏病研究领域亟待解决的重要科学问题。以往有研究者发现在糖尿病大鼠尿液中足细胞微粒的释放早于微量白蛋白尿的产生。

发明内容

发明目的：针对现有技术存在的问题，本发明一种慢性肾小球疾病肾小球硬化标志物，所称的标志物为尿液中足细胞微粒，该足细胞微粒具有特定双层膜结构的细胞外囊泡，利用流式细胞仪的方法，鉴定慢性肾小球疾病患者尿液中足细胞微粒，尿液中足细胞微粒在慢性肾小球疾病患者甚至在不同程度的肾小球硬化中差异表达，检测待测样本中尿液中足细胞微粒数量，能够判断或者辅助判断慢性肾小球疾病肾小球硬化的发生和/或发展，确定尿液中足细胞微粒能够作为慢性肾小球疾病肾小球硬化筛查或者辅助筛查诊断的标志物。

本发明还提供一种慢性肾小球疾病肾小球硬化标志物的检测试剂盒。

技术方案：为了实现上述目的，如本发明所述一种慢性肾小球疾病肾小球硬化标志物，其特征在于，所述标志物为尿液中足细胞微粒。

所述足细胞微粒为足细胞在激活或发生凋亡时细胞膜出芽释放的直径在100-1000nm大小的双层膜囊泡状结构，而非外泌体，该足细胞微粒具有特定双层膜结构的细胞外囊泡。

所述标志物能够携带足细胞特异性膜蛋白podocalyxin。