[发明专利]基于Taqman探针的肾小管上皮细胞特异性基因检测荧光定量PCR一步法试剂盒有效
| 申请号： | 201810580404.0 | 申请日： | 2018-06-07 |
| 公开（公告）号： | CN108728528B | 公开（公告）日： | 2021-08-24 |
| 发明（设计）人： | 刘必成;周乐汀;雷向东 | 申请（专利权）人： | 东南大学;上海境象生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6883 | 分类号： | C12Q1/6883 |
| 代理公司： | 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204 | 代理人： | 孙斌 |
| 地址： | 211102 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 taqman 探针 肾小管 上皮细胞 特异性 基因 检测 荧光 定量 pcr 一步法 试剂盒 | ||
1.一种基于Taqman探针的肾小管上皮细胞特异性基因检测荧光定量PCR一步法试剂盒，其特征在于，包括检测BBOX1基因的上下游引物及探针，其核苷酸序列如SEQ ID NO. 1-3所示；检测B2M内参基因的上下游引物及探针，其核苷酸序列如SEQ ID NO. 4-6所示。
2.根据权利要求1所述的基于Taqman探针的肾小管上皮细胞特异性基因检测荧光定量PCR一步法试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括PCR酶混合液和MasterMix。
3.根据权利要求2所述的基于Taqman探针的肾小管上皮细胞特异性基因检测荧光定量PCR一步法试剂盒，其特征在于，所述PCR酶混合液为m-mlv 逆转录酶和RNase inhibitor混合液。
4.根据权利要求1所述的基于Taqman探针的肾小管上皮细胞特异性基因检测荧光定量PCR一步法试剂盒，其特征在于，所述BBOX1和B2M基因的探针连接的荧光基团为FAM-BHQ 1。
5.根据权利要求1-4任一所述的基于Taqman探针的肾小管上皮细胞特异性基因检测荧光定量PCR一步法试剂盒，其特征在于，所述探针5’端标记的荧光报告基团是FAM，3’端连接淬灭基团。
6.根据权利要求4所述的基于Taqman探针的肾小管上皮细胞特异性基因检测荧光定量PCR一步法试剂盒，其特征在于，所述BHQ 1为非荧光淬灭基团。
7.一种权利要求1所述的基于Taqman探针的肾小管上皮细胞特异性基因检测荧光定量PCR一步法试剂盒在制备检测基因BBOX1和B2M试剂中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述检测基因时PCR反应体系为10ul，包括提取的样本RNA 1ul，上下游引物和探针混合液3.5ul，PCR酶混合液0.5ul，MasterMix 5ul。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述检测基因时荧光定量PCR反应条件为：42℃ 5min；95 ℃ 10min；95℃ 20s， 60℃退火/延伸45s，循环45次；40℃冷却30 s。
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