[发明专利]带负电荷的细胞穿透肽及作为细胞内运送载体的用途

说明书

本发明提供了一类带负电荷细胞穿透肽及其同源物，具有细胞内化功能，细胞穿透肽在生理条件下净电荷为负值；氨基酸序列为：ELDGDV、LQEDTPP、DPNEKRD、DHMKQHD、NYTWDQW、TTDRHDL、SEQPAHS、DHYHPFS、SDAKNDL、DPYHPFS、SLTNTEH、TVSKGEE、EHYHPFM、TDTTPLQ、GGSAETG、DGPGTAA、SLTAPDY、PLDVNNM、DGTPVGM、LQNLGEF、DSHLSLM、VGSPDGL、DLNLPFA或PLLEGSL。作为细胞内运送载体的用途以及带负电荷细胞穿透肽作为治疗药物在细胞内的运送载体的医药用途及在成像方面的用途。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，特别涉及一类带有负电荷的细胞穿透肽的序列特征及其作为哺乳动物胞内运送载体在生物学和医药领域的应用。

技术背景

细胞膜是细胞与细胞外环境间的半透性屏障，具有选择性通透作用从而使细胞保持恒定的内环境。虽然这种磷脂双分子层对于细胞的存活和功能必不可少，它却给细胞内外货物分子的交换提出了挑战。由于蛋白、多肽、核苷酸等药物大分子物质和显影剂必须要达到细胞内部才能发挥相应的作用，因此实现这些物质的跨膜转运变得非常必要。

目前，能够向细胞内转运大分子的技术主要有电穿孔(electroporation)、显微注射(microinjection)、脂质体转染(transfection)和病毒载体(viral vector)等，但这些技术由于效率低下、安全性差等原因，难以应用于临床诊断和治疗药物的研发。近年来，有关细胞穿透肽(cell-penetrationpeptides，CPPs)的研究为解决上述问题提供了一个良好的机遇。关于CPPs的首次报道出现在1988年，Frankel等发现来源于人免疫缺陷病毒HIV-1转录激活因子的蛋白Tat具有穿透细胞膜和核膜，并锚定于特异基因调控区的能力(Cell,1988,55:1189-1193)。随后研究还发现，Tat蛋白中的一段长度为11个氨基酸残基的碱性氨基酸序列YGRKKRRQRRR发挥了蛋白转运的作用(J Biol Chem,1997,272:16010-16017)。经过二三十年的探索，人们逐渐认识到，CPPs是一类长约9～16个氨基酸的小分子多肽，富含碱性氨基酸。作为一种有效的运输载体，CPPs在体内外可以将多肽、蛋白、核酸、肽核酸、脂质体、显像剂、纳米大小颗粒等多种物质有效地运送入细胞，适用于几乎所有的真核细胞，并且具有蛋白转导发生迅速、操作简单，毒性、副作用较小等优点。