[发明专利]一种从柽柳中提取分离山奈甲黄素和槲皮素-3′，4′-二甲醚的方法

说明书

本发明公开了一种从柽柳中提取分离山奈甲黄素和槲皮素‑3′，4′‑二甲醚的方法，属于植物化学成分分离技术领域。方法包括如下步骤：利用乙醇‑酸水溶液回流提取柽柳枝叶、花或果实，合并提取液并浓缩至无醇味得提取物酸水溶液；该酸水溶液通过大孔吸附树脂柱，以蒸馏水和不同体积分数的乙醇进行梯度洗脱，收集洗脱液并浓缩至干得树脂纯化物；树脂纯化物使用硅胶柱色谱进行分离，以石油醚‑丙酮为洗脱剂进行梯度洗脱，合并相同流份，经重结晶后得到纯度均大于97％的山奈甲黄素和槲皮素‑3′，4′‑二甲醚。本方法结合大孔树脂和硅胶柱色谱同时分离了高纯度的山奈甲黄素和槲皮素‑3′，4′‑二甲醚，操作步骤少、快速、简便易行、成本低，适合工业化生产。

技术领域

本发明属于植物化学成分分离技术领域，具体涉及一种从柽柳中分离山奈甲黄素和槲皮素-3′，4′-二甲醚的方法。

背景技术

柽柳(Tamarix chinensisLour)为柽柳科柽柳属植物，是一种典型的耐盐药用植物。柽柳嫩枝叶为一味传统的中药，又称西河柳，中国药典记载其具有发表透疹，祛风除湿等功效，可用于治疗麻疹不透、风湿痹痛等症。柽柳中含有多种黄酮化合物，包括山奈甲黄素、槲皮素-3′，4′-二甲醚、柽柳素、槲皮素、山奈酚、芹菜素、鼠李柠檬素、山奈酚-4′,7-二甲醚、芦丁、柽柳素-7-O-β-D-葡萄糖苷等。

山奈甲黄素又名山奈素，是一种游离黄酮化合物，在柽柳、沙姜、槐角、金钱草、天山花楸叶等多种植物中均有分布，常被用作中药制剂的含量测定指标。研究表明，山奈甲黄素具有显著的抗肿瘤活性，如能抑制胃癌细胞增殖转移、诱导胃癌细胞凋亡等。另外，山奈甲黄素还具有抗氧化、抗炎、止咳祛痰、降压等多种药理活性。槲皮素-3′，4′-二甲醚也为一种游离黄酮化合物，在柽柳、五层龙及滇桂艾纳香等植物中有分布，具有抗炎活性。因此，制备高纯度的山奈甲黄素和槲皮素-3′，4′-二甲醚用作药理活性研究及中药质量控制的标准品是非常有必要的。

尽管目前已发现多种植物中含有山奈甲黄素和槲皮素-3′，4′-二甲醚，但由于含量低或分离工艺难度大等方面的问题，适合分离高纯度山奈甲黄素和槲皮素-3′，4′-二甲醚的工业化方法至今还研究较少。

发明内容

为解决上述问题，本发明旨在提供一种从柽柳中同时分离高纯度山奈甲黄素和槲皮素-3′，4′-二甲醚的方法。该方法简便有效、步骤少、周期短、成本低、提取效率高，适合工业化生产。

本发明包括以下具体步骤：

1.柽柳原料干燥粉碎后，加入乙醇-酸水溶液室温下浸泡24h，使用回流法进行提取，提取完毕，回收溶剂至无醇味，得提取物酸水溶液；

2.所得提取物酸水溶液上样到大孔树脂柱，依次用蒸馏水和不同体积分数的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压蒸馏回收溶剂至干得树脂纯化物；

3.将树脂纯化物上样到硅胶柱，用石油醚-丙酮进行梯度洗脱，经TLC分析，分别收集含有山奈甲黄素和槲皮素-3′，4′-二甲醚的流份，经重结晶后得山奈甲黄素和槲皮素-3′，4′-二甲醚。

所述的步骤1中，柽柳原料为柽柳枝叶、柽柳花和柽柳果实中的一种。

所述的步骤1中，乙醇-酸水溶液为体积分数60％-80％的乙醇(含盐酸、甲酸和三氟乙酸中的任一种，酸的质量分数为0.2％-0.5％)，回流法提取溶剂用量料液比为1：6-1：12，提取温度为70-90℃，提取时间为0.5-2h；提取次数为1-3次。

所述的步骤2中，使用的大孔树脂为HPD-300树脂、HPD-400树脂和D101树脂中的任一种，上样流速为2-4BV/h，上样体积为5-10BV。

所述的步骤2中，洗脱方式为使用蒸馏水、30％、70％和90％乙醇梯度洗脱，用量分别为5-8BV，洗脱流速为2-4BV/h，收集70％和90％乙醇洗脱物，减压蒸馏回收溶剂至干得树脂纯化物。