[发明专利]高活力高纯度人体肠菌胶囊制备方法

说明书

本发明提供了一种在无菌环境中利用新鲜人类粪便提取肠菌制成具有高活力高纯度人体肠菌胶囊的方法，采集的人类粪便样品在厌氧无菌条件下匀浆过滤一次完成，采用两步差异离心，分别采用低速离心和高速离心，使用两次离心的离心力和离心时间的差异纯化和浓缩肠菌。采用本发明的方法，在人类粪便样本离体后迅速分离出约98％的肠道菌群，保持了肠菌的高活性；制成的肠菌胶囊纯度高、无异味，在低温下可以保存两年，便于服用。

技术领域

本发明涉及医疗技术领域，具体涉及一种高活力高纯度人体肠菌胶囊制备方法。

背景技术

在人体肠道中寄生着多种微生物，影响着人体的健康，主要菌群为专性厌氧菌，包括拟杆菌、双歧杆菌、乳酸杆菌、芽孢杆菌、肠球菌、肠杆菌等。双歧杆菌、乳酸杆菌等细菌是人体健康不可缺少的要素，可以促进肠道消化，提高人体免疫力，还可以合成各种微生物。因此，人体肠道中的有益菌对人体非常重要。

发明内容

本发明的目的是提供一种高活力高纯度人体肠菌胶囊制备方法，操作步骤简单，提取和保存人体肠菌方便。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种高活力高纯度人体肠菌胶囊制备方法，包括以下步骤：

步骤1，人类粪便的采集和厌氧保存：使用采集容器采集人类粪便，向采集容器中加入少量无菌生理盐水；盖紧采集容器的盖子，在2小时内送至GMP级别洁净实验室；

步骤2，对采集人类粪便的采集容器称重，计算得出人类粪便的重量，按每50克人类粪便加300毫升无菌生理盐水的比例补加无菌生理盐水；

步骤3，将人类粪便和无菌生理盐水一起倒入样品匀浆袋中，在所述匀浆袋中设有滤网，所述滤网将匀浆袋分为容纳腔一和容纳腔二，将人类粪便和无菌生理盐水的混合物倒入容纳腔中；锁紧袋口，放入厌氧匀浆拍打机中，厌氧匀浆拍打机对匀浆袋进行拍打；

步骤4，从厌氧匀浆拍打机中取出匀浆袋，用自动取样器吸取容纳腔二的滤液，放入50毫升无菌离心管中，进行低速离心；

步骤5，取低速离心后无菌离心管中的上清液，将上清液转移到新的无菌离心管中，进行高速离心；

步骤6，将高速离心后的无菌离心管中的上清液倒出来，将剩余混合物加入细菌抗冻保存剂甘油中，剩余混合物与细菌抗冻保存剂甘油的体积比为9∶1；将剩余混合物和细菌抗冻保存剂甘油混合均匀后，用无菌移液管取悬浮液，将悬浮液逐滴加入0号肠溶胶囊；每一粒0号肠溶胶囊中注入0.6毫升悬浮液，盖上囊帽，再将整粒0号肠溶胶囊装入00号肠溶胶囊中，制成肠菌胶囊。

进一步，在所述步骤1中，所述无菌生理盐水是浓度为0.9％的氯化钠溶液。

进一步，在所述步骤1中，向采集容器中加入的无菌生理盐水的体积为300毫升。

进一步，在所述步骤3中，厌氧匀浆拍打机的拍打时间为15-300秒。

进一步，在所述步骤4中，低速离心的离心力为800-3000xg，离心时间为3-20分钟，温度为4-20℃。

进一步，在所述步骤5中，高速离心的离心力为3000-16000xg，离心时间为10-40分钟，温度为4-20℃。

进一步，在所述步骤6中，将制成的肠菌胶囊放置在-80℃温度条件下保存。

综上所述，由于采用了上述技术方案，本发明与现有技术相比，有以下优点：

本发明操作步骤简单，匀浆过滤一次完成，两步差异离心实现了肠菌的纯化和浓缩，胶囊灌制手工完成即可。由于操作时间短，全程厌氧环境控制得当，肠菌的活性得以最大程度保存。由于离心条件的优化，本发明制成的肠菌胶囊中包含了原样品中约98％的肠菌，制成的肠菌胶囊较肠菌溶液保存更方便，制作和使用成本更低，使用体验有了很大提升。