[发明专利]一种构建基于淋巴瘤基因检测的高通量测序文库的方法及其应用

权利要求书

1.一种构建基于淋巴瘤基因检测的高通量测序文库的方法，其特征在于：包括以下步骤：

针对目的基因建立引物库，利用所述引物库中的引物获取目标DNA片段构建形成所述高通量测序文库，其中，所述目的基因包括ABL1、ACTG1、AKT1、ARID1A、ATM、ATP6AP1、ATP6V1B2、B2M、BCL10、BCL11B、BCL2、BCL6、BCOR、BIRC3、BRAF、BTG1、BTG2、BTK、CARD11、CASP10、CCND1、CCND3、CCR4、CCR7、CD28、CD58、CD70、CD79A、CD79B、CD83、CDKN1B、CDKN2A、CHD2、CNOT3、CREBBP、CRLF2、CTNNB1、CXCR4、DDX3X、DIS3、DNM2、DNMT3A、DTX1、DUSP2、EBF1、EED、EGR1、EGR2、EIF2A、EP300、ETV6、EZH2、FAM46C、FAS、FAT1、FBXW7、FGFR3、FLT3、FOXO1、FYN、GATA3、GNA13、GNAQ、GPR183、HIF1A、HIST1H1B、HIST1H1C、HIST1H1D、HIST1H1E、HNRNPA2B1、HRAS、HVCN1、ID3、IDH1、IDH2、IGLL5、IKBKB、IKZF1、IKZF3、IL7R、IRF4、ITPKB、JAK1、JAK2、JAK3、KDM6A、KIT、KLF2、KLHL6、KMT2C、KMT2D、KRAS、LTB、MAP2K1、MAP3K14、MAPK1、MAX、MED12、MEF2B、MYC、MYD88、NF1、NFE2、NFKBIE、NOTCH1、NOTCH2、NRAS、NT5C2、PAX5、PHF6、PIK3CA、PIK3R1、PIM1、PLCG1、PLCG2、POT1、POU2AF1、POU2F2、PRDM1、PRKCB、PTEN、PTPN1、PTPN11、RB1、RHOA、RPL10、RPS15、RRAGC、SAMHD1、SETD2、SF3B1、SGK1、SH2B3、SMARCA4、SMARCB1、SOCS1、STAT3、STAT5B、STAT6、TBL1XR1、TCF3、TET1、TET2、TMSB4X、TNFAIP3、TNFRSF14、TNFRSF1B、TP53、TRAF3、TRRAP、U2AF1、USP7、VAV1、VMA21、WHSC1、WT1和XPO1。

2.根据权利要求1所述的构建基于淋巴瘤基因检测的高通量测序文库的方法，其特征在于：所述引物库是选取所述目的基因的外显子区域或热点区域，进行多重PCR引物设计，根据设计好的引物进行引物合成并混合后构建而成的。

3.根据权利要求2所述的构建基于淋巴瘤基因检测的高通量测序文库的方法，其特征在于：所述引物库包括多对引物对，所述多对引物对中至少一对引物对的正向引物与反向引物中的特异性序列分别包含核苷酸序列如SEQ ID No.m与SEQ ID No.(m+93)所示的特异性序列，其中，m为从1到93的任意一个自然数。

4.根据权利要求1所述的构建基于淋巴瘤基因检测的高通量测序文库的方法，其特征在于：所述获取目标DNA片段的操作是通过多重PCR扩增法或杂交捕获法得到目标DNA片段。

5.根据权利要求4所述的构建基于淋巴瘤基因检测的高通量测序文库的方法，其特征在于：所述多重PCR扩增法的具体操作为：在每个多重PCR反应后的装置中，添加不同的NGS测序标签，然后再在两端连接含有测序所需的接头，并利用磁珠进行纯化，最终得到带测序接头的目标DNA片段混合体，即构建形成所述高通量测序文库。

6.根据权利要求5所述的构建基于淋巴瘤基因检测的高通量测序文库的方法，其特征在于：所述测序标签采用Illumina的测序标签序列，其最终文库结构为：测序接头I-XX-AA-测序接头II，其中，测序接头I和测序接头II为Illumina测序所需的两端接头核苷酸序列，所述测序接头I的核苷酸序列如SEQ ID No:187所示，所述测序接头II的核苷酸序列如SEQID No:188所示；所述XX为不同序列的index；所述AA为PCR产物。