[发明专利]一种高通量miRNAs表达谱的检测方法及生物传感器

权利要求书

1.一种高通量miRNAs表达谱的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)探针制备：对于待检测的miRNAs表达谱中的每一miRNA，将其互补的探针序列与具有特异发射光谱的量子点共价结合，获得具有特异发射光谱的miRNA-量子点探针；

(2)生物传感器制备：将步骤(1)中获得的所有具有特异发射光谱的miRNA-量子点探针与氧化石墨烯室温孵化，使得所述miRNA-量子点探针吸附在所述纳米石墨烯表面，获得miRNAs纳米生物传感器；

(3)miRNA表达谱检测：将经扩增的待检测寡核苷酸混合物与步骤(2)中获得的miRNAs纳米生物传感器避光孵化后洗脱，并将检测洗脱液的荧光信号谱，对于待检测的miRNAs表达谱中的每一miRNA，根据荧光信号谱中其用于标记所述miRNA的miRNA-量子点探针的特异发射光谱强度，按照强度越强表达量越高的原则，确定所述miRNA表达丰度。

2.如权利要求1所述的高通量miRNAs表达谱的检测方法，其特征在于，步骤(1)具体为：

(1-1)对于待检测的miRNAs表达谱中的每一miRNA：将其互补的探针序列5’端采用氨基标记，获得氨基标记的探针；

(1-2)对于待检测的miRNAs表达谱中的每一miRNA：将步骤(1-1)中获得的氨基标记的探针3’端采用量子点标记。

3.如权利要求2所述的高通量miRNAs表达谱的检测方法，其特征在于，步骤(1-1)所述将其互补的探针序列5’端采用氨基标记，在氨基和碱基之间插入烷基链，所述烷基链可表示为-(CH₂)_2n-，其中1≤n≤12。

4.如权利要求2所述的高通量miRNAs表达谱的检测方法，其特征在于，步骤(1-2)所述量子点为羧基水溶性量子点。

5.如权利要求2所述的高通量miRNAs表达谱的检测方法，其特征在于，所述氨基标记的探针与所述量子点的质量比例为30～50:1。

6.如权利要求1所述的高通量miRNAs表达谱的检测方法，其特征在于，步骤(3)所述miRNAs纳米生物传感器浓度以其中氧化石墨烯浓度记在10μg/ml至14μg/ml。

7.如权利要求1所述的高通量miRNAs表达谱的检测方法，其特征在于，步骤(3)所述将经扩增的待检测寡核苷酸混合物，其扩增方法为滚环扩增，具体方法如下：

将寡核苷酸混合物变性、退火后，加入连接缓冲液混合物、连接酶、锁式探针、以及待检测的miRNAs，恒温孵育，将所述miRNAs与滚环连接起来，再在扩增反应条件下进行滚环扩增。

8.一种应用于如权利要求1至7任意一项所述高通量miRNAs表达谱的检测方法的生物传感器，其特征在于，包括氧化石墨烯基质、以及具有特异发射光谱的量子点标记的miRNA-量子点探针，所述miRNA-量子点探针通过π-π堆积作用与所述氧化石墨烯基质吸附。

9.如权利要求8所述的生物传感器，其特征在于，所述量子点标记的miRNA-量子点探针，包括与其靶标miRNA互补的探针序列、以及羧基水溶性量子点，所述探针序列的3’端与羧基水溶性量子点共价结合。

10.如权利要求9所述的生物传感器，其特征在于，所述探针序列为5’端氨基标记核糖核苷酸序列，其氨基与核糖核苷酸5’端插入烷基链，所述烷基链可表示为-(CH₂)_2n-，其中1≤n≤12。