[发明专利]肝移植中HLA-C1/C2基因PCR-SSP快速鉴定方法

说明书

本发明基于HLA‑C1/C2基因的序列特征和HLA‑C基因组全长序列的单核苷酸多态性(SNPs)，采用HLA‑C位点特异性PCR引物和HLA‑C1/C2组特异性引物扩增策略，即设计一条共用的HLA‑C基因特异性PCR扩增引物，分别与一条针对HLA‑C1的组特异性PCR引物、一条针对HLA‑C2的组特异性PCR引物进行配组，仅用2个PCR反应分别扩增HLA‑C1、C2基因；由于所用引物具有相近的退火温度，可在同一PCR扩增条件下进行同步扩增；扩增产物经琼脂糖电泳检测，可清晰直观地判定受检者的HLA‑C1/C2基因型，无需大型贵重设备、无需对当前国际上IMGT/HLA数据库已公布的3800余种HLA‑C等位基因进行基因分型；具有实验操作简单、所需时间短、成本低，适合于肝移植前对肝供体进行快速检测，以减少急性排斥、提高移植效果。

技术领域

本发明涉及生物医学，特别是涉及一种临床肝移植急性排斥相关的人类白细胞抗原HLA-C1/C2的PCR-SSP快速鉴定方法。

背景技术

人类白细胞抗原(HLA)为人类主要组织相容性系统，承担重要的免疫识别、免疫应答和免疫调节的功能，与骨髓和实体器官移植的排斥反应密切相关。HLA-C分子为经典的HLA I类分子，不仅递呈内源性抗原肽给CD8+T细胞识别，介导特异性T细胞的免疫应答反应；而且作为杀伤细胞免疫球蛋白样受体(Killer immunoglobulin-like receptor,KIR)的配体，调节自然杀伤细胞的活性^[1]，在移植免疫、肿瘤免疫和机体抗感染中发挥了重要作用。HLA-C分子由一条具有多态性的α多肽链(45kDa)和一条由位于15号染色体基因编码、没有多态性的β2微球蛋白(12kDa)通过非共价键组成异二聚体。编码α链的HLA-C基因共包括8个外显子及7个内含子；其中第1外显子编码引导肽，第2、第3、第4外显子分别编码α1、α2、α3区，第5外显子编码跨膜区，第6～8外显子编码胞浆尾。

HLA-C分子为KIR受体的重要配体，根据IPD-KIR数据库(https://www.ebi.ac.uk/ipd/kir/ligand.html)和HLA-C分子第80位氨基酸残基的差异^[2-3]，HLA-C分子可分为HLA-C1组(α1螺旋区第80位氨基酸残基为天冬氨酸)和HLA-C2组(α1螺旋区第80位氨基酸残基为赖氨酸)。所有的HLA-C分子均为KIR的配体，HLA-C1分子特异性识别KIR2DL2、KIR2DL3、KIR2DS2，而HLA-C2特异性识别KIR2DL1及KIR2DS1。