[发明专利]一种介导性CA16灭活疫苗、其制备方法及其应用

说明书

本发明提供了一种介导性CA16灭活疫苗，包括免疫量的CoxA16病毒灭活纯化抗原，还包括甘油、蔗糖、角鲨烯、Tween‑20和硫酸乙酰肝素。本发明提供了一种可用于制备经特定免疫模式进行免疫的介导性CA16灭活疫苗，该疫苗制品经细胞内化介导进入呼吸道粘膜细胞后，可刺激上皮细胞内天然免疫系统，促进DC系统及T/B细胞对病毒抗原的识别及特异性免疫系统的启动和分化。

技术领域

本发明属于医学生物技术领域。具体地说，本发明涉及一种通过介导CoxA16病毒抗原进入呼吸道粘膜细胞的介导性CA16灭活疫苗及其免疫方法。

背景技术

柯萨奇病毒A16型(Coxsackievirus A 16 Strain,CA16)作为肠道病毒家族的成员之一，在儿童常见的手足口病(Hand,Foot and Mouth Disease,HFMD)的病原谱中具有重要意义。2008年，我国安徽省阜阳地区亦出现了较大规模的手足口病流行，而且感染者主要出现在婴幼儿，因此引起了社会各界的严重关切。对此，我国卫生部自2008年5月起，将手足口病正式列入法定报告的传染病种类之中。2009年，我国手足口病的病原体流行特征，由2008年的以EV71病毒感染为主，逐渐转变为EV71和CA16的共流行，并且这样的流行特征趋势有增无减。有数据表明，CA16病毒与EV71病毒引起的手足口病例比例已达该病例的80％以上。随着EV71灭活疫苗的上市应用，CA16病毒很可能成为儿童手足口病的主要病原。因此，CA16疫苗的研发与应用也明显具有重要的公共卫生意义。

近年来，随着相关研究工作的推进，对CA16疫苗的研究已取得多重的技术进步，但由于CA16病毒感染的病理学及相关免疫学机理仍不十分清楚，其产品迄今尚未取得实质性进展。我们前期有关CA16灭活疫苗的非人灵长类实验结果提示，常规的CA16灭活疫苗制备方法及常规免疫模式难以获得良好的免疫反应，尤其是在病毒攻击时未能表现有效的免疫临床保护效果。尽管这一动物模型的结果尚不能完全支持CA16病毒在人体内的感染与免疫机理，但深入优化和探讨CA16灭活疫苗制备方法及疫苗免疫模式，对该疫苗免疫学机理过程的进一步了解显然是十分必要的。

本发明所采用的CA16病毒灭活抗原，其毒种及其制备技术均具有自主知识产权。(中国专利号为CN201210328369.6，授权公告号为CN102839159B)

发明内容

本发明的目的在于克服现有的CA16灭活疫苗及免疫模式的不足，利用特定配方进行介导性CA16灭活疫苗的制备，其能够通过细胞内化介导进入呼吸道粘膜细胞，并刺激上皮细胞内天然免疫系统，募集并激活不同型别的天然淋巴细胞(Innate Lymphoid Cells，ILCs)，协同DC细胞的抗原摄取和递呈。诱导完整有效的特异性免疫反应。

本发明技术方案的提出基于下述思路：

大量的人群流行病学和临床观察，以及我们前期的动物实验结果提示，CA16和EV71均可以通过人体呼吸系统导致感染，而呼吸道上皮组织作为具有天然免疫机能的器官，在机体抗病毒感染免疫反应的激活过程中能够发挥重要的作用。而近期受到人们广泛关注的天然淋巴细胞ILCs则是完成这一作用的主要成分之一。这类被分为三个型别(ILC1、ILC2、ILC3)的细胞群通常在上皮细胞产生的一类以TNFα因子家族成员为主的配体信号分子的刺激下激活，并通过表达特征性受体和配体发挥信号传递作用及非特异性炎症介导效应，以及机理尚不清楚的特异性免疫反应协调效应，这样一个系统的过程，形成了机体特异性抗病毒免疫反应的基础。