[发明专利]一种利用微生物发酵制备葡萄糖氧化酶的方法有效
| 申请号： | 201810592729.0 | 申请日： | 2018-06-11 |
| 公开（公告）号： | CN108384766B | 公开（公告）日： | 2020-12-08 |
| 发明（设计）人： | 张宝华;潘宏渊;洪成;蒋一南 | 申请（专利权）人： | 宁波天皓生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/04 | 分类号： | C12N9/04;C12N1/14;C12N1/20;C12R1/685;C12R1/245 |
| 代理公司： | 江苏长德知识产权代理有限公司 32478 | 代理人： | 冯娟 |
| 地址： | 315615 浙江省*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 微生物 发酵 制备 葡萄糖 氧化酶 方法 | ||
1.一种利用微生物发酵制备葡萄糖氧化酶的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
第一阶段培养：黑曲霉种子液按照6-8%的接种量含有发酵培养基的发酵罐中进行培养，培养温度为30-34℃，罐压为0.02-0.03MPa，风量为500-600L/h，培养时间为30-40h；
第二阶段培养：将干酪乳杆菌种子液按照8-10%的接种量接入到发酵罐中，再添加甲醇，继续培养，通过流加氨水控制pH为7.2-7.8，得到发酵液，离心，收集上层液体，即为粗酶液；
所述甲醇的添加量为0.1-0.2wt%。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述离心的转速为2000rpm，时间为5min。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第二阶段的培养时间为20-30h。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述黑曲霉种子液的制备方法为：将黑曲霉划线接种在斜面培养基上培养，然后接种到种子培养基进行培养，获得密度为（1-2）×108CFU/mL的黑曲霉种子液；所述斜面培养基组分为：马铃薯150g/L，蔗糖20g/L，琼脂15g/L；所述种子培养基的组分均为：蔗糖20g/L，酵母膏10g/L，硫酸铵5g/L，磷酸二氢钾1g/L，磷酸氢二钾1g/L，七水硫酸镁0.02g/L，一水硫酸锰0.01g/L，七水硫酸亚铁0.01g/L。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述干酪乳杆菌种子液的制备方法为：将干酪乳杆菌接入到MRS琼脂培养基中进行培养，然后接种到MRS液体培养基中进行种子培养，获得密度为（3-5）×108CFU/mL的干酪乳杆菌种子液。
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