[发明专利]一种检测畜禽粪便样本中多种真菌毒素的方法

权利要求书

1.一种用于检测粪便样本中真菌毒素的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)样本前处理：

A、将待测样本在冷冻干燥机中干燥后使用高速粉碎机粉碎混匀，-20℃冻存或直接进入下一步；

B、酶解：称取粉碎后的样本于离心管中，加入酶缓冲液，涡旋混匀后振荡酶解，所述酶缓冲液为β-葡萄糖醛酸酶缓冲液；

C、振荡超声提取：在酶解后的样本中加入提取溶剂，涡旋振荡，超声萃取，其中，所述提取溶剂为乙腈水溶液，所述乙腈水溶液的浓度为乙腈/水体积比：84/16，所述乙腈水溶液中还含有10％NaCl；

D、离心浓缩：将超声提取的样本离心，转移上清液在水浴下氮气吹干，残渣用提取溶剂定容至1mL，并超声帮助复溶，涡旋；

E、过滤分析：将复溶得到的溶液过有机滤膜后待测；

(2)将待测液在TQS三重四级杆液相色谱串联质谱仪中进行梯度洗脱分析，色谱条件如下：

Agilent Poroshell 120，EC-C18色谱柱，色谱柱规范为：2.7μm，3.0mm×100mm；

流动相A为甲醇；

流动相B为醋酸铵水溶液，所述醋酸铵水溶液的浓度为5mmol/L；

流速为0.4mL/min；

进样量3μL；

柱温40℃，

所述梯度洗脱的程序如下：

质谱条件如下：

雾化气压采用电喷雾ESI^﹢和ESI^﹣离子源；质谱分析范围m/z 200～800；喷雾电压：ESI^﹢3.0kV和ESI^﹣2.5kV；离子源温度150℃；脱溶剂气温度500℃；锥孔反吹气流量150L/h；脱溶剂气流量1000L/h；碰撞池压力7.0bar；多反应离子监测(MRM)采集，

其中，所述真菌毒为伏马毒素B1(FB1)、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、赭曲霉毒素、玉米赤霉烯酮中的4种，其中，

脱氧雪腐镰刀菌烯醇包括DON、DOM、3-ADON、15-ADON和FUSX；

赭曲霉毒素包括OTA、OTB和OTα；

玉米赤霉烯酮包括ZEA、ZAN、α-ZOL、β-ZOL、α-ZAL和β-ZAL。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(1)B中，称取粉碎后的样本1.00～5.00g。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，称取粉碎后的样本2.00～3.00g。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，称取粉碎后的样本2.00g。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(1)B中，所述离心管为具塞离心管。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述离心管体积为30～100mL。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述离心管为40～60mL。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述离心管为50mL。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(1)B中，所述酶缓冲液加入量为5～30μL。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述酶缓冲液加入量为8～15μL。

11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述酶缓冲液加入量为10 μL。

12.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(1)C中，所述涡旋振荡的时间为1～10min。

13.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，所述涡旋振荡的时间为3～8min。