[发明专利]一种检测畜禽粪便样本中多种真菌毒素的方法

说明书

本发明公开了一种用于检测畜禽粪便样本中多种真菌毒素的方法，将样本经β‑葡萄糖醛酸酶酶解之后，经乙腈/水溶液（84/16，v/v,含10%NaCl）超声提取、离心、浓缩、复溶后直接在TQS三重四级杆液相色谱串联质谱仪中以甲醇和5 mmol/L醋酸铵的水溶液（含0.1%甲酸）作为流动相进行梯度洗脱分析，15种真菌毒素能够达到有效分离。本发明的方法没有复杂的衍生净化步骤，具有简便快捷、经济高效的特点，能够同时快速地检测样本中多种真菌毒素，可有效检测样本中的真菌毒素残留量。

技术领域

本发明涉及食品安全检测技术领域，具体地，涉及一种用于检测畜禽粪便样本中多种真菌毒素的方法。

背景技术

真菌毒素，是一类由霉菌在生长过程中产生的有毒次级代谢产物，对人和动物都有极大的危害。目前报道的真菌毒素已有400多种，在自然界中广泛存在于各类粮食谷物及其他食品当中，导致大量的饲料原料、饲料或食品被其污染，其中常被用作食品、饲料或者饲料原料的玉米、大豆、麸糠等尤其容易发生霉变进而被其产生的真菌毒素污染。动物食品因其独特的口感和富含营养物质而广受人们的喜爱，当这些被污染的原料被不良商家用饲料或被加工成饲料后喂养动物，会通过对其机体内遗传物质、蛋白质和各种酶类物质的合成进行抑制以及破坏细胞结构等作用途径引起机体的急性或亚急性中毒，同时也会导致毒素在机体内的残留。一旦这些污染的谷物或动物食品被人们食用，会严重危害人类的健康。

目前，关于霉菌毒素的检测方法已有诸多研究报道，如：薄层色谱法(TLC)，但其灵敏度差，不能满足当前高要求的痕量分析；免疫分析法(ELISA)虽然灵敏度高、特异性强，但其存在较多干扰因素而易造成假阳性，多用于样本初筛或快速检测，不能作为准确定量分析方法；气相色谱法(GC)、气相色谱串联质谱法(GC-MS/MS)虽然检出限低、重现性好，但其样本分析前还需衍生化，检测速度较慢，对于同时检测多种霉菌毒素不适用。由于液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)的宽实用性和高选择性使其具备高通量分析能力，目前已成为真菌毒素检测方法的应用重点。

目前学者研究重点主要是黄曲霉毒素、赭曲霉毒素和镰刀菌毒素类，而且现有霉菌毒素检测方法检测样本基质主要集中于食品原料、较少同时检测动物粪便中多种毒素代谢物、检测限也难以满足食品安全监控需求。因此，建立一种快速简便、高通量、高灵敏度的用于检测畜禽粪便中4类常见霉菌毒素(伏马毒素、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、赭曲霉毒素、玉米赤霉烯酮)及其代谢标志物残留的方法，能为代谢工作者的研究提供思路，也可应用于动物源食品中真菌毒素的痕量分析，具有重要意义。

发明内容

为此，本发明提供一种用于检测样本中真菌毒素的方法，其包括以下步骤：

(1)样本前处理：

A、将待测样本在冷冻干燥机中干燥后使用高速粉碎机粉碎混匀，-20℃冻存或直接进入下一步；

B、酶解：称取粉碎后的样本于离心管中，加入酶缓冲液，涡旋混匀后振荡酶解，

优选地，称取粉碎后的样本1.00～5.00g，更优选地，称取粉碎后的样本2.00～3.00g，最优选地，称取粉碎后的样本2.00g，

优选地，所述离心管为具塞离心管，更优选地，所述离心管体积为30～100mL，更优选地，所述离心管为40～60mL，最优选地，所述离心管为50mL，

所述酶缓冲液为β-葡萄糖醛酸酶缓冲液，优选地，所述酶缓冲液加入量为5～30μL，更优选地，所述酶缓冲液加入量为8～15μL，最优选地，所述酶缓冲液加入量为10μL；

C、振荡超声提取：在酶解后的样本中加入提取溶剂，涡旋振荡，超声萃取，

优选地，所述涡旋振荡的时间为1～10min，更优选地，所述涡旋振荡的时间为3～8min，最优选地，所述涡旋振荡时间为5min；