[发明专利]一种以草甘膦为筛选剂的胡萝卜遗传转化的方法

说明书

本发明公开了一种以草甘膦为筛选剂的胡萝卜遗传转化的方法。该方法是以草甘膦为筛选剂，对胡萝卜的外植体进行遗传转化；胡萝卜的外植体为胡萝卜的下胚轴或用该下胚轴截成的节段。实验证明，本发明提供的方法不仅大大缩短了获得再生植株的时间(60‑70d)，而且具有较高的转化阳性率(91％)。与传统的以卡那霉素为筛选剂的胡萝卜遗传转化方法相比，获得再生植株的时间缩短两周左右，转化阳性率提高了6％。由此可见，本发明提供的方法是一种高效可行的遗传转化方法，可大大减少转基因鉴定的工作量，具有重大的应用价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种以草甘膦为筛选剂的胡萝卜遗传转化的方法。

背景技术

胡萝卜(Daucus carota L.)为伞形科植物，是重要的蔬菜作物之一。胡萝卜块根营养丰富，富含维生素A前体类胡萝卜素和植物纤维，在欠发达国家，胡萝卜已经成为维生素A的主要来源。关于胡萝卜的研究，在营养成分的鉴定、遗传工程改良新品种、基因组结构方面取得了非常瞩目的成就，胡萝卜全基因组测序的完成(Iorizzo,M.,Ellison,S.,Senalik,D.,Zeng,P.,Satapoomin,P.,Huang,J.,Bowman,M.,Iovene,M.,Sanseverino,W.,Cavagnaro,P.,et al.A high-quality carrot genome assembly provides newinsights into carotenoid accumulation and asterid genome evolution.Nat Genet(2016)48:657-666)，是胡萝卜研究领域里程碑式的成就。然而胡萝卜遗传材料的获得主要依靠自然突变体，这严重限制了胡萝卜功能基因组学的研究。遗传转化的研究不仅能够促进胡萝卜基础研究的发展，而且为胡萝卜遗传性状的分子改良奠定了基础。

目前，胡萝卜的遗传转化技术虽然比较成熟，但是过程比较繁琐，耗时较长，应用的筛选条件假阳性比较高。建立一种高效省时的胡萝卜遗传转化方法具有重要价值。

发明内容

本发明的目的是提供一种新的胡萝卜遗传转化方法，旨在缩短获得再生胡萝卜植株的时间和/或提高转化阳性率。

本发明首先提供了一种胡萝卜遗传转化方法，是以草甘膦为筛选剂，对胡萝卜的外植体进行遗传转化。

所述“以草甘膦为筛选剂，对胡萝卜的外植体进行遗传转化”可包括如下步骤：

(1)将含有目的基因的重组表达载体导入农杆菌，得到重组农杆菌；

(2)取步骤(1)得到的重组农杆菌，对胡萝卜的外植体进行侵染；

(3)完成步骤(2)后，将所述外植体置于共培养培养基，进行共培养；

(4)完成步骤(3)后，将所述外植体置于诱导培养基，培养，获得愈伤组织；

(5)完成步骤(4)后，将所述愈伤组织依次置于初筛培养基和筛选培养基进行培养，获得胚性愈伤组织；

(6)完成步骤(5)后，将所述胚性愈伤组织置于分化培养基进行培养，获得出芽的胚性愈伤组织；

(7)完成步骤(6)后，将所述出芽的胚性愈伤组织置于生根培养基进行培养，获得胡萝卜转化苗。