[发明专利]核酸、重组质粒、转化株、乙酰胆碱酯酶及其制备方法

权利要求书

1.一种分离的核酸，其特征在于，序列如SEQ ID NO.1所示，其编码一乙酰胆碱酯酶融合蛋白。

2.一种诱导型重组质粒，其特征在于，包含依序排列的如SEQ ID NO.2所示的一诱导型表达组件、如SEQ ID NO.3所示的一启动子、如SEQ ID NO.1所示的一核酸及如SEQ ID NO.4所示的一抗生素抗性基因。

3.如权利要求2所述的诱导型重组质粒，更包含一如SEQ ID NO.5所示的一标签，其连接于如SEQ ID NO.1所示的该核酸的3’端。

4.一种转化株，其特征在于，包含：

一宿主细胞，其中该宿主细胞为一大肠杆菌(Escherichia coli)；以及

如权利要求2所述的诱导型重组质粒。

5.如权利要求4所述的转化株，其中该大肠杆菌为一氧化态大肠杆菌。

6.如权利要求5所述的转化株，其中该氧化态大肠杆菌为AD494(DE3)菌株或Origami(DE3)菌株。

7.一种无糖基化乙酰胆碱酯酶的制备方法，其特征在于，包含：

提供一液态培养物，其中该液态培养物包含如权利要求4至6任一项所述的转化株；

进行一诱导步骤，培养该转化株至菌体浓度的光学密度值达0.5至0.7时，于一诱导温度下加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导一诱导时间，使该诱导型重组质粒表达乙酰胆碱酯酶融合蛋白，其中该诱导温度为4℃至16℃或30℃，当诱导温度为4℃至16℃时该诱导时间为2天至6天，当诱导温度为30℃时该诱导时间为7小时至12小时；

进行一分离步骤，将该转化株自该液态培养物分离；以及

进行一纯化步骤，破坏该转化株的细胞后，以一纯化方式纯化该无糖基化乙酰胆碱酯酶，其中该纯化方式为经由Ni⁺-NTA纯化或利用浓度为8M的尿素纯化。

8.一种根据权利要求7的制备方法制得的无糖基化乙酰胆碱酯酶，其特征在于，具有水解乙酰胆碱的活性。