[发明专利]耐药基因mcr-4/5/8荧光定量PCR检测方法

权利要求书

1.引物组合甲，由引物对Ⅰ、引物对Ⅱ和引物对Ⅲ组成；

所述引物对Ⅰ由引物F1和引物R1组成；

所述引物F1为序列表的序列1所示的单链DNA分子；

所述引物R1为序列表的序列2所示的单链DNA分子；

所述引物对Ⅱ由引物F2和引物R2组成；

所述引物F2为序列表的序列3所示的单链DNA分子；

所述引物R2为序列表的序列4所示的单链DNA分子；

所述引物对Ⅲ由引物F3和引物R3组成；

所述引物F3为序列表的序列5所示的单链DNA分子；

所述引物R3为序列表的序列6所示的单链DNA分子。

2.权利要求1所述引物组合甲在制备用于检测待测样本中的3种多黏菌素耐药基因mcr-4/5/8的试剂盒中的应用。

3.含有权利要求1所述引物组合甲的试剂盒；所述试剂盒的用途为检测待测样本中的3种多黏菌素耐药基因。

4.权利要求3所述试剂盒的制备方法，包括将各条引物单独包装的步骤。

5.一种待测样本中的3种多黏菌素耐药基因的方法，包括如下步骤：以待测样本的核酸为模板，分别采用权利要求1中的引物对I至引物对Ⅲ进行PCR扩增，如果采用引物对I可以实现对模板的阳性扩增，待测样本携带mcr-4基因；如果采用引物对Ⅱ可以实现对模板的阳性扩增，待测样本携带mcr-5基因；如果采用引物对Ⅲ可以实现对模板的阳性扩增，待测样本携带mcr-8基因；所述方法为非疾病诊断和治疗的方法。

6.一种检测待测样本中的3种多黏菌素耐药基因的方法，包括如下步骤：检测待测样本的核酸中是否含有权利要求1中的引物对I至引物对Ⅲ的靶序列，如果所述核酸中含有引物对I的靶序列，待测样本携带mcr-4耐药基因；如果所述核酸中含有引物对Ⅱ的靶序列，待测样本携带mcr-5耐药基因；如果所述核酸中含有引物对Ⅱ的靶序列，待测样本携带mcr-8耐药基因；所述方法为非疾病诊断和治疗的方法。

7.一种检测待测样本中的3种多黏菌素耐药基因的方法，包括如下步骤：以待测样本的核酸为模板，分别采用权利要求1中的引物对I至引物对Ⅲ进行荧光定量PCR扩增，根据Ct值对待测样本中的mcr基因进行定量；所述方法为非疾病诊断和治疗的方法。

8.引物组合乙，为如下(a)或(b)：

(a)权利要求1中的所述引物对Ⅲ；

(b)权利要求1中的所述引物对Ⅰ或所述引物对Ⅱ与所述引物对Ⅲ的组合。

9.权利要求8所述引物组合乙在制备试剂盒中的应用，所述试剂盒的用途为检测待测样本中的多黏菌素耐药基因；所述多黏菌素耐药基因为mcr-4基因或mcr-5基因或mcr-8基因。