[发明专利]绵羊肺炎支原体和丝状支原体山羊亚种双重荧光定量方法在审
| 申请号： | 201810599079.2 | 申请日： | 2018-06-12 |
| 公开（公告）号： | CN108823324A | 公开（公告）日： | 2018-11-16 |
| 发明（设计）人： | 林裕胜;胡奇林;江锦秀;张靖鹏;游伟 | 申请（专利权）人： | 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6851;C12Q1/06;C12N15/11;C12R1/35 |
| 代理公司： | 福州元创专利商标代理有限公司 35100 | 代理人： | 蔡学俊 |
| 地址： | 350013 *** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 丝状支原体山羊亚种 绵羊肺炎支原体 荧光探针 双重荧光定量PCR 特异性检测引物 支原体 流行病学调查 支原体性肺炎 荧光定量PCR 特异性引物 快速检测 双重荧光 特异性强 有效手段 鉴别 检测 节约 | ||
1.一种绵羊肺炎支原体和丝状支原体山羊亚种双重荧光定量PCR引物和探针，其特征在于，检测绵羊肺炎支原体的特异性引物及探针的序列分别为：
上游引物Mo-F: 5’- CTTCGGGACTTATTGGAG-3’；
下游引物Mo-R: 5’-GATGCAAACTGATTTACTTG-3’；
荧光探针Mo-P: 5’-FAM- AAGACCGATTGTCAGGCCGA –Eclipse-3’；
检测丝状支原体山羊亚种的特异性引物及探针的序列分别为：
上游引物Mmc-F: 5’- CTAGCTAGCATAGTTGTTG-3’；
下游引物Mmc-R: 5’- GCTTGAACAACTATATTGTA -3’；
荧光探针Mmc-P: 5’-TET- TAACACAGTTAAAGCAGACCCACCA–BHQ-3’。
2.一种检测绵羊肺炎支原体和丝状支原体山羊亚种双重荧光定量PCR方法，其特征在于，所述方法包括：
设计及合成权利要求1所述的引物和探针；
制备阳性质粒标准品；
进行双重荧光定量PCR反应条件的优化，建立双重荧光定量PCR检测体系；
采用双重荧光定量PCR检测体系对支原体进行检测。
3.根据权利要求2所述的检测绵羊肺炎支原体和丝状支原体山羊亚种双重荧光定量PCR方法，其特征在于，所述双重荧光定量PCR检测体系具体包括：常规方法提取待测样品的DNA，再以DNA为模板进行双重荧光定量PCR反应。
4.根据权利要求3所述的检测绵羊肺炎支原体和丝状支原体山羊亚种双重荧光定量PCR方法，其特征在于，所述双重荧光定量PCR反应的反应体系为含有模板、引物Mo-F、引物Mo-R、探针Mo-P、引物Mmc-F、引物Mmc-R、探针Mmc-P、Premix Ex Taq™ (Probe qPCR)和DEPC水。
5.根据权利要求3所述的绵羊肺炎支原体和丝状支原体山羊亚种双重荧光定量PCR方法，其特征在于，所述双重荧光定量PCR反应的反应条件为：95℃ 3min， 95℃ 10s,55℃30s,72℃ 20s 40个循环。
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