[发明专利]一种具有大斯托克斯位移的重组荧光蛋白质及其制备方法有效
| 申请号： | 201810600293.5 | 申请日： | 2018-06-12 |
| 公开（公告）号： | CN108841846B | 公开（公告）日： | 2021-08-06 |
| 发明（设计）人： | 陈华新;姜鹏 | 申请（专利权）人： | 中国科学院海洋研究所 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C07K14/795 |
| 代理公司： | 沈阳科苑专利商标代理有限公司 21002 | 代理人： | 李颖 |
| 地址： | 266071 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 具有 斯托 位移 重组 荧光 蛋白质 及其 制备 方法 | ||
1.一种大肠杆菌中具有大斯托克斯位移的重组藻蓝蛋白类荧光蛋白质的制备方法，其特征在于：
1）利用基因工程方法，将藻胆蛋白裂合酶基因cpcS插入第一个表达载体中，将藻蓝蛋白β亚基基因cpcB和藻胆蛋白裂合酶cpcT组成多顺反子插入第二个表达载体的一个表达框中，将血红素氧化酶基因Ho1和藻红胆素还原酶基因pebS组成多顺反子插入到第二个表达载体的另一个表达框中；所述第一个表达载体需要阿拉伯糖诱导外源基因的表达，含有阿拉伯糖诱导启动子；第二个表达载体需要乳糖诱导外源基因的表达，含有乳糖诱导启动子；
2）将上述两个载体共转化到大肠杆菌中，先添加乳糖，后添加阿拉伯糖，在不同时机诱导外源基因表达，发酵合成获得共价结合一个藻尿胆素分子和一个藻红胆素分子的重组藻蓝蛋白类荧光蛋白质，通过亲和层析的方法，纯化得到相应的重组荧光蛋白质。
2.按权利要求1所述的大肠杆菌中具有大斯托克斯位移的重组藻蓝蛋白类荧光蛋白质的制备方法，其特征在于：所述第一个表达载体为pBad-HisA，pBad-HisB或pBad-HisC；第二个表达载体为pRSFDuet-1，pCDFDuet-1或pACYCDuet-1。
3.一种利用权利要求1制备方法获得的具有大斯托克斯位移的重组藻蓝蛋白类荧光蛋白质，其特征在于：其为共价结合一个藻红胆素分子和一个藻尿胆素分子的斯托克斯位移达68.5 nm的重组藻蓝蛋白类荧光蛋白质。
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