[发明专利]一种细胞穿膜肽及其制备方法、应用

说明书

本发明公开了一种细胞穿膜肽及其制备方法、应用，所述细胞穿膜肽包括如下序列：RRRRRKQARRPRRRRAR。且所述细胞穿膜肽安全，穿膜效果显著。

技术领域

本发明涉及生物医学领域，尤其涉及一种人源性细胞穿膜肽及其制备方法、应用。

背景技术

机体细胞膜屏障仅仅允许分子量小于600Da的非脂溶性分子进入活细胞，虽对机体有重要的保护作用，但也使许多有应用前景的药物被摒弃。细胞穿膜肽(cell-penetrating peptides，CPPs)，是一些小于30个氨基酸的短肽，能够携带分子量比自身大许多倍的分子进入细胞。细胞穿膜肽有多种分类方式，根据理化性质可以分为阳离子、双亲性和疏水性穿膜肽。

在生物体内，蛋白质带正电荷的序列能增强蛋白质与RNA的结合，从而发挥对RNA调控或者选择性剪切的功能。因此，可以通过搜索具有此类功能的蛋白以筛选阳离子穿膜肽。但目前尚未开发出具有上述功能的阳离子穿膜肽。

发明内容

针对上述现有技术中的缺陷，本发明提供了一种人源性细胞穿膜肽及其制备方法、应用，且所述细胞穿膜肽安全，穿膜效果显著。

本发明为解决上述技术问题所提供的技术方案如下：

一方面，提供了一种细胞穿膜肽，其包括如下序列：RRRRRKQARRPRRRRAR。

另一方面，还提供了一种上述细胞穿膜肽的制备方法，其包括如下步骤：

S1、提供树脂，且将所述树脂在第一溶剂中浸泡至所述树脂溶胀；

S2、将氨基酸、缩合剂溶于第二溶剂中，形成混合物；

S3、在所述混合物加入溶胀的树脂中形成反应体系，反应时间为1-4h；

S4、去除反应后所述反应体系中的溶液，对残留物洗涤1-5次，气体鼓动，抽干；

S5、在所述残留物中加入脱帽液，气体鼓动，抽干；

S6、去除经由步骤S5后的反应体系中的溶液，洗涤1-10次，气体鼓动，抽干，由此获得合成的多肽链；

S7、在所述多肽链中加入切割液，在4-30℃下搅拌1-4h，过滤得滤液，且洗涤所述滤液；

S8、对经洗涤过的滤液进行萃取，离心得到细胞穿膜肽粗品；

以及S9、对所述细胞穿膜肽粗品进行鉴定和纯化。

优选的，所述树脂包括Fmoc-Wang树脂。

优选的，在步骤S2中，所述缩合剂包括苯并三唑鎓盐型缩合剂；在步骤S1中，所述第一溶剂包括：二氯甲烷、二甲基甲酰胺、二氯甲烷及四氢呋喃中的一种或几种；在步骤S5中，所述脱帽液包括：二甲基甲酰胺溶液，以及溶解于二甲基甲酰胺溶液中的6％W/V的哌嗪和0.1M HOBT；在步骤S7中，所述切割液包括：以重量百分数计，95％的TFA、2％的TIS以及3％的H₂O。

优选的，所述苯并三唑鎓盐型缩合剂包括O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸盐、O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸盐中的一种或几种。

优选的，每种氨基酸与所述树脂的投料摩尔量比例为(1:1)-(10:1)；所述缩合剂与所述树脂的投料摩尔量比例为(1:1)-(10:1)。

优选的，所述步骤S8中，所述萃取包括：在经洗涤过的滤液中加入无水乙醚，放置1-4h；且所述无水乙醚与滤液的体积比为(5:1)-(60:1)。

另一方面，还提供一种上述细胞穿膜肽的应用方法，所述细胞穿膜肽用于在C端或N端共价或非共价连接标记物或载物分子，并携带所述标记物或载物分子穿过细胞膜进入细胞。