[发明专利]牛病毒性腹泻病毒鉴别检测试纸条及其制备方法

权利要求书

1.一种牛病毒性腹泻病毒抗体检测试纸条，由支撑底板、包被吸附材料层、蛋白标记承载材料层、样品缓冲材料层、液体吸收材料层、外层保护材料组成；其特征在于，

所述包被吸附材料设有测试线和质控线；所述测试线上有抗猪IgG单抗、兔抗猪IgG二抗、金黄色葡萄球菌A蛋白中的至少一种；所述质控线上有抗牛病毒性腹泻高免血清IgG；

所述试纸条的蛋白标记采用胶体金标记；所述蛋白标记所用的蛋白为从噬菌体多肽文库中筛选所得的与BVDV抗体结合的噬菌体单克隆；所述噬菌体单克隆表达的多肽表位为LTPHKHHKHLHA。

2.根据权利要求1所述的牛病毒性腹泻病毒抗体检测试纸条，其特征在于， 所述支撑底板的材料为不吸水的硬质纸条或PVC。

3.根据权利要求1所述的牛病毒性腹泻病毒抗体检测试纸条，其特征在于， 所述包被吸附材料层的材质为硝酸纤维素膜、醋酸纤维素膜、混合纤维素膜、FUSION 5、尼龙膜、聚偏二氟乙烯膜、聚酯膜中的任意一种。

4.根据权利要求1所述的牛病毒性腹泻病毒抗体检测试纸条，其特征在于， 所述蛋白标记承载材料层或所述样品缓冲材料层的材质为玻璃纤维膜、FUSION 5、聚酯膜中的任意一种。

5.根据权利要求1所述的牛病毒性腹泻病毒抗体检测试纸条，其特征在于， 所述液体吸收材料层的材质为吸水纸、FUSION 5、吸水纤维中的任意一种。

6.根据权利要求1所述的牛病毒性腹泻病毒抗体检测试纸条，其特征在于， 所述外层保护材料层的材质为塑料胶膜或成型塑料外壳。

7.根据权利要求1所述的牛病毒性腹泻病毒抗体检测试纸条，其特征在于， 所述测试线和质控线组合排列形式为“=”、 “┷”、“+” 中的一种。

8.根据权利要求1所述的牛病毒性腹泻病毒抗体检测试纸条，其特征在于，所述噬菌体单克隆的筛选方法为：

（1）将BVDV 抗血清包被；

（2）将噬菌体文库稀释；

（3）将所述稀释的噬菌体与所述包被的BVDV抗体结合；

（4）将所述与抗体结合的噬菌体洗脱后进行扩增获得噬菌体多克隆，挑选阳性克隆；

（5）将BVDV 抗血清包被，将所述噬菌体多克隆阳性克隆进行第二轮结合、洗脱、和扩增；

（6）将所述步骤（1）～（5）重复3次；

（7）将上述经第三次洗脱和扩增的噬菌体多克隆进行感染扩增，形成单克隆；

（8）挑选上述单克隆进行扩增并提取基因组DNA 后测序；

（9）根据序列筛选目的单克隆。

9.一种权利要求1所述的牛病毒性腹泻病毒抗体检测试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）金标噬菌体单克隆的制备：将待标记的噬菌体单克隆除去杂质，生理盐水调整浓度至0.2mg/ml；采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金；胶体金调整pH 9.0；加入0.5ml～20ml的所述噬菌体单克隆，混匀温育；加入BSA，混匀孵育离心弃上清；沉淀用BSA 重悬，离心弃上清；沉淀用重悬缓冲液混匀备用；

（2）金标垫的制备：将所述金标噬菌体单克隆稀释；将蛋白标记的重悬液按照3～15ul/cm的用量喷射在所述蛋白标记承载材料层上，扩散宽度为2～8mm，加入干燥剂密封保存；

（3）硝酸纤维素膜的制备：将所述测试线上的蛋白和所述质控线上的蛋白分别稀释至0.5mg/ml～10mg/ml，按照0.5～1.5ul/cm的用量分别喷射在所述包被吸附材料层上的所述测试线和所述质控线处；

（4）组装各部件，剪裁成条状的试纸条，即得。