[发明专利]牛病毒性腹泻病毒鉴别检测试纸条及其制备方法

说明书

本发明公开了一种牛病毒性腹泻病毒鉴别检测试纸条及其制备方法，以快速灵敏检测BVDV抗体。该试纸条由支撑底板、包被吸附材料层、蛋白标记承载材料层、样品缓冲材料层、液体吸收材料层、外层保护材料组成；所述包被吸附材料设有测试线和质控线；所述试纸条的蛋白标记采用胶体金标记；所述蛋白标记所用的蛋白为从噬菌体多肽文库中筛选所得的与BVDV抗体结合的噬菌体单克隆；所述噬菌体单克隆表达的多肽表位为LTPHKHHKHLHA。其制备方法包括金标噬菌体单克隆的制备、金标垫的制备、硝酸纤维素膜的制备、组装各部件，即得。本发明可以在十分钟之内获得检测结果，快速敏感，成本低，操作简单易于基层在生产和科研中推广和应用。

技术领域

本发明涉及家畜病毒诊断技术领域，具体涉及一种牛病毒性腹泻病毒鉴别检测试纸条及其制备方法。

背景技术

牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus，BVDV)、猪瘟病毒(Classicalswine fever virus，CSFV)及人丙型肝炎病毒（Hepatitis C virus，HCV)等都属于黄病毒科瘟病毒属。

BVDV感染引起免疫抑制从而激发呼吸道感染，病毒感染引起孕期母畜流产等对养牛业造成巨大经济损失，是养牛业所面临的最重要的疾病之一。BVDV能够通过胎盘传播，而导致胎儿持续性感染（Persistently infection，PI），PI 牛终生带毒而成为重要传染源。BVDV病毒除了感染牛以外，还可以感染猪、羊等40多种动物，并引起发病，急性感染后可以转为持续性感染（Persistent infection， PI）。除了牛之外多种PI患畜都终生带毒、排毒，促进了本病毒的传播。目前已确定有8种动物可以发生BVDV持续性感染（PI）。

目前，多种方法可以用来检测BVDV病毒，如病毒分离，免疫组化技术，ELISA抗原检测试剂盒，免疫荧光技术及PCR等技术。但是上述检测方法实验操作复杂周期长，另外由于该技术都依赖于一定的仪器而限制了野外临诊应用。当前我国尚未使用BVDV疫苗，当前有商品化的BVDV抗体检测试剂盒适合用于检测BVDV抗体，通过检测血清抗体而筛查BVDV PI牛，而然该试剂盒主要依赖于进口产品，价格昂贵极大的限制了应用。

随着我国畜牧业的迅猛发展，亟需开发价格低廉而适合于在底层广泛推广使用的检测方法和试剂盒，以进行PI患畜筛查。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种牛病毒性腹泻病毒鉴别检测试纸条及其制备方法，以快速灵敏检测BVDV抗体，便于在基层进行推广使用。

为解决上述技术问题，本发明的技术思路为：

提供一种从噬菌体多肽文库中筛选获得与BVDV抗体结合的噬菌体单克隆, 利用该噬菌体制备抗原，研制适用对BVDV抗体进行快速检测的试纸条，以适用于在生产和科研中推广和应用。

具体采用如下技术方案：

设计一种牛病毒性腹泻病毒抗体检测试纸条，由支撑底板、包被吸附材料层、蛋白标记承载材料层、样品缓冲材料层、液体吸收材料层、外层保护材料组成；

所述包被吸附材料设有测试线和质控线；所述测试线上有抗猪IgG单抗、兔抗猪IgG二抗、金黄色葡萄球菌A蛋白中的至少一种；所述质控线上有抗牛病毒性腹泻高免血清IgG；

所述试纸条的蛋白标记采用胶体金标记；所述蛋白标记所用的蛋白为从噬菌体多肽文库中筛选所得的与BVDV抗体结合的噬菌体单克隆；所述噬菌体单克隆表达的多肽表位为LTPHKHHKHLHA。

优选的， 所述支撑底板的材料为不吸水的硬质纸条或PVC。

优选的， 所述包被吸附材料层的材质为硝酸纤维素膜、醋酸纤维素膜、混合纤维素膜、FUSION 5、尼龙膜、聚偏二氟乙烯膜、聚酯膜中的任意一种。