[发明专利]一种检测广佛手8种真菌毒素的方法

说明书

本发明公开了一种测定广佛手8种真菌毒素的方法，本发明在一个体系中同时测定8种真菌毒素(赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮、伏马毒素B1、杂色曲霉毒素、黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2)，采用Thermo Hypersil GOLD色谱柱进行分离，以0.1％甲酸水‑甲酸乙腈作为流动相；采用电喷雾电离模式，正负离子同时扫描。结果表明本发明对8种真菌霉素在线性范围内关系良好；检出限在0.16～5ng/mL之间，在低、中、高三种添加水平下的回收率为79.0～112.8％，而且采用了同位素内标法。本发明基质效应对真菌毒素的检测结果影响不大、准确性高、精密度好、专属性强、简便快捷，可用于中药材中真菌毒素的多成分测定。

技术领域

本发明涉及一种测定广佛手中8种真菌毒素的方法，属于中药检测领域。

背景技术

佛手是芸香科柑橘属植物(Citrus medica L.var.sarcodactylisSwingle)的成熟果实，主产于广东，在福建、四川、浙江等地区亦有栽培。其中，来自广东肇庆、高要、德庆、郁南等地的佛手称为“广佛手”，为广东地道产品。广佛手不仅可以当作药材，还可用于沏茶、泡酒，甚至还可做成佳肴，具有健脾和胃、舒筋活血、理气化痰的功效。2016年5月31日，首批广东立法保护岭南中药材品种诞生，广佛手是首批入选的8种中药材之一，可见广佛手作为广东地道药材，在“广药”面向全国推广中具有重要战略意义。

由于广东湿热的亚热带气候，中药材在种植、采集、贮存、加工等过程容易受真菌污染，从而产生多种真菌毒素，严重影响中药材的质量和用药安全。目前，粮食、食品中的真菌及其毒素污染已受到广泛重视，并提出了防控措施、法规及限量标准。为了保证中药材的用药安全性，完善质量标准，构建一种能同时检测中药材中多种真菌毒素的方法极为迫切。

发明内容

本发明的目的在于提供一种测定广佛手8种真菌毒素的方法。

本发明所采取的技术方案是：

一种测定广佛手8种真菌毒素的方法，其特征在于，包括以下步骤：

一.溶液的配制

混合内标溶液的制备：用乙腈配制¹³C₃₄-FB1、¹³C₂₀-OTA、¹³C₁₈-ZEN这三种内标的混合内标溶液；

供试品溶液的制备：将广佛手样品研细混匀，加甲醇-甲酸-水，加入¹³C₁₇-AFB1和混内标溶液混匀，超声离心处理，吸取上清液于35～42℃氮气吹干，甲醇水溶液复溶，过滤膜，得供试品溶液；

对照品溶液制备：用甲醇制备不同浓度的OTA，乙腈制备不同浓度的FB1、ZEN、ST、AFB1、AFB2、AFG1、AFG2混合标准溶液，按照供试品溶液的制备方法，得到系列不同浓度的对照品溶液；

二.测定

将上述制备的供试品溶液和对照品溶液进行LC-MS/MS检测。

进一步的，所述供试品溶液的制备步骤为：

称取0.50～1.50g广佛手样品研细混匀，加3～4mL甲醇-甲酸-水，加入1～5uL的¹³C₁₇-AFB1和混内标溶液混匀，超声离心处理，吸取1～2mL上清液于35～42℃氮气吹干，加入250～750μL甲醇-水溶液复溶，过滤膜，得供试品溶液。

进一步的，所述对照品溶液的制备步骤为：