[发明专利]一种基于体外红细胞模型精准评价抗氧化健康效益的方法

权利要求书

1.一种基于体外红细胞模型精准评价抗氧化健康效益的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)体外红细胞的制备：采集哺乳动物静脉血离心收集压积红细胞，将压积红细胞定量悬浮到红细胞等渗溶液稀释得到含红细胞8％-15％(V/V)的红细胞悬液；

(2)分组、氧化应激诱导及供试品给药处理：

分组具体是将所述红细胞悬液分为三组，并对它们进行氧化应激诱导及供试品给药处理从而得到模型组、空白对照组及供试组共三组，其中，

所述模型组具体是向红细胞悬液中加入红细胞氧化应激诱导剂，该红细胞氧化应激诱导剂为诱导剂与红细胞等渗溶液的混合物；

所述空白对照组具体是向红细胞悬液中仅加入红细胞等渗溶液；

所述供试组具体是向红细胞悬液中加入供试品与所述红细胞氧化应激诱导剂的混合物，所述供试品包括膳食提取物、经过纯化后的膳食单一抗氧化成分、或天然药物提取物中的至少一种；

所述模型组、所述空白对照组及所述供试组中，任意一组中压积红细胞的含量均在2-5％(V/V)，

将这三组在无菌条件下37℃孵育24-48h，然后离心收集红细胞；

(3)体外红细胞生化分析及样品制备：

测定上述各组的红细胞溶血率，若溶血率满足5-30％范围则分别收集上述各组红细胞，制备用于分析各组红细胞中NAD、NADH、NADP、及NADPH四个辅酶化合物浓度的样品；然后测量各组样品的辅酶浓度；

(4)各组体外红细胞的IPDR值计算：

将测得的辅酶浓度值代入公式(1)中，分别计算所述模型组、所述空白对照组及所述供试组的IPDR值，并分别记为Xm、Xc、Xi；

所述公式(1)中，NAD⁺代表测得的NAD辅酶浓度，NADH代表测得的NADH辅酶浓度，NADP⁺代表测得的NADP⁺辅酶浓度，NADPH代表测得的NADPH辅酶浓度；

(5)供试品的健康效益判别：

将Xm、Xc、Xi代入公式(2)计算HI，进行供试品的健康效益判别；

所述公式(2)中，Xmin为Xm与Xc中的小值，Xmax为Xm与Xc中的大值。

2.如权利要求1所述基于体外红细胞模型精准评价抗氧化健康效益的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，在采集哺乳动物静脉血后是先进行抗凝处理再进行离心收集压积红细胞；所述红细胞等渗溶液为所含葡萄糖终浓度为5mM的葡萄糖与质量百分浓度为1.4％的碳酸氢钠混合溶液、或所含葡萄糖终浓度为5mM的葡萄糖与生理盐水的混合溶液、或所含葡萄糖终浓度为5mM的葡萄糖与PBS缓冲液的混合溶液；

所述红细胞悬液还经过孵育处理，该孵育处理具体是在无菌条件下，37℃孵育2-10h。

3.如权利要求1所述基于体外红细胞模型精准评价抗氧化健康效益的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，分组处理时，任意一组均包括多个平行样品，任意一个样品均包含150-300μL的红细胞悬液，

对于所述模型组，加入的所述诱导剂能够满足使该模型组在无菌条件下37℃孵育24h内的溶血率控制在5-30％范围；

所述诱导剂与红细胞等渗溶液的混合物具体为所含葡萄糖终浓度为280mM的葡萄糖与质量百分浓度为1.4％的碳酸氢钠混合溶液、或者所含葡萄糖终浓度为150mM的葡萄糖与PBS缓冲液的混合溶液，或者所含葡萄糖终浓度为150mM的葡萄糖与生理盐水的混合溶液；

在所述供试品与所述红细胞氧化应激诱导剂的混合物中，所述膳食提取物和所述天然药物提取物均是按终浓度为1-10mg固体/ml的添加量溶解在红细胞氧化应激诱导剂中，所述经过纯化后的膳食单一抗氧化成分则是先用DMSO溶解，再用红细胞氧化应激诱导剂稀释至终浓度为10-100μM。

4.如权利要求1所述基于体外红细胞模型精准评价抗氧化健康效益的方法，其特征在于，所述步骤(3)中，所述辅酶浓度的测量方法为试剂盒法、HPLC法及UPLC-MS/MS方法中的任意一种。