[发明专利]一种香蕉花花朵及花萼成分分析方法

权利要求书

1.一种香蕉花花朵及花萼成分分析方法，其特征在于：包括(1)香蕉花超音波萃取成分分析，(2)香蕉花冷冻干燥成分分析，(3)香蕉花萼超音波萃取成分分析，(4)香蕉花萼冷冻干燥成分分析；

所述成分分析包括抗氧化力分析，总酚含量分析，总花青素含量分析，懈皮素含量分析，白藜芦醇含量分析，羽扇豆醇含量分析，多糖体含量分析；

所述抗氧化力分析包括DPPH自由基捕捉能力和ABTS自由基清除活性；

其中，所述DPPH自由基捕捉能力分析方法包括先将300ul的样品甲醇提取物与900ul的0.4mmol/LDPPH甲醇溶液混合，接着放置于室温下避光反应30分钟后，用分光光度计于517nm处测量并记录其吸光值，利用公式估算样品的清除活性公式如下：SA(％)＝(A0-A1/A0)×100；

A0为空白组的吸光值、A1为测试样品的吸光值；计算可清除50％DPPH自由基的提取物浓度；利用Trolox和丁基羟基甲苯(BHT)做为标准品进行对照，每个样品进行三次重复；

其中，所述ABTS自由基清除活性分析方法包括预先制备含浓度为7.4mmol/L的ABTS水溶液和浓度为2.6mmol/L过硫酸钾溶液，将等体积的ABTS水溶液和过硫酸钾溶液混合并使其在室温下在避光反应12-16小时以生成稳定之暗蓝色ABTS自由基，然后用甲醇将溶液稀释，直到在734nm的波长下吸光值为1.1后备用，取20ul样品加入2mL稀释后的ABTS自由基试剂中混和，接着放置于室温下避光反应6分钟，以分光光度计在734nm测定其吸光值，带入Trolox标准曲线中即可得到ABTS抗氧化能力，结果表示为抗氧化能力的Trolox当量；

所述总酚含量分析方法包括取50ul浓度为20-180ug/mL的样品提取物溶液加入450ul福林酚的10倍稀释试剂振荡混合，静置5分钟，再加入500ul15％Na₂CO₃溶液，于室温避光1小时后，测定765nm波长下的吸光值，对照没食子酸标准品制作校正曲线，换算每克提取物中所含没食子酸毫克数；

所述总花青素含量分析方法包括先将1mL的提取物分别加入两个试管中，接着加入1mL以95％乙醇配制而成的0.01％HCl溶液至两管中，然后于第一管中加入10mL2％HCl水溶液；而于第二管中加入10mL由0.2mol/LNa₂HPO₄和0.1mol/L柠檬酸制备pH＝3.5的混合溶液，混和均匀后，测量两管试剂在520nm处的吸光值，而空白组以水替代样品进行试验，将吸光值带入公式即可获得样品的总花青素含量；

其中，所述公式如下：总花青素含量＝(B1-B2)×f；

其中，f＝396.598,而B1为第一管的吸光值；B2为第二管的吸光值；

所述懈皮素含量分析方法包括先将样品提取物通过0.45um过滤器过滤，取过滤后的样品提取物10ul进注入高效液相色谱色谱柱中，采用C18逆相层析管柱进行分离；制备流动相，使用流动相溶液进行梯度洗脱，以UV检测器于355nm检测；而另外以槲皮素作为外部标准品，绘制标准浓度和平均峰面积之间的标准曲线进行定量；

其中，所述流动相溶液包括体积比为1:1的0.1％三氟醋酸水溶液和乙腈溶液；

其中，所述梯度洗脱依次包括0-10分钟，浓度为5-6％乙腈溶液；10-15分钟，浓度为6-10％乙腈溶液；15-45分钟，浓度为10-19％乙腈溶液；45-65分钟，浓度为19-20％乙腈溶液；

其中，所述流动相溶液的流速为1mL/min；

所述白藜芦醇含量分析方法包括先将样品提取物通过0.45um过滤器过滤，取10ul过滤后的提取物进注入高效液相色谱色谱柱中，采用C18逆相层析管柱进行分离；按乙腈：水为35：65的比例制备流动相，控制流动相溶液的流速为1mL/min，以UV检测器于306nm处测量其吸光值；使用反式白藜芦醇作为标准品，绘制标准浓度和平均峰面积之间的标准曲线进行定量；

所述羽扇豆醇含量分析方法包括先取2.7mg标准羽扇豆醇以真空过滤后的甲醇配制成2.7mg/mL的标准品溶液备用；将样品的粗提取物以真空过滤后的甲醇溶解后，经过0.22um过滤器过滤制备成样品液；分别取60ul的标准品溶液和样品液注入高效液相色谱色谱柱中，采用C18逆相层析管柱进行分离；检测波长为280nm处的吸光值，将得到的色谱峰与标准品的色谱图进行比较，即可得知羽扇豆醇的含量；

羽扇豆醇含量分析方法中高效液相色谱的条件如下：

移动相由甲醇，pH为7.2磷酸盐缓冲液和超纯水组成；

溶剂系统的线性洗脱程序设定为4％磷酸盐缓冲液和96％超纯水2分钟；50％甲醇，1％磷酸盐缓冲液和49％超纯水2-6分钟；80％甲醇，2％磷酸盐缓冲液和18％超纯水持续6-26分钟；50％甲醇，1％磷酸盐缓冲液和49超纯水26-30分钟；以及磷酸盐缓冲液和96％超纯水最后5分钟，

所述移动相以1mL/min恒定的流速递送；

所述多糖体含量分析方法采用定量分析；所述定量分析包括：

步骤1、配制已知浓度葡萄糖标准溶液，先分别加入0.5mL的5％苯酚试剂，再立刻加入2.5mL硫酸并将其震荡混和均匀后，置于室温下反应20分钟，待反应完全，颜色呈现稳定的橘黄色液体后，再以分光光度计于490nm测其吸光值；并绘制标准溶液曲线，以葡萄糖浓度为横坐标，以吸光值为纵坐标，拟合标准溶液曲线公式；

步骤2、配置提取物稀释液，在稀释液中加入0.5mL的5％苯酚试剂，再立刻加入2.5mL硫酸并将其震荡混和均匀后，置于室温下反应20分钟，待反应完全，颜色呈现稳定的橘黄色液体后，再以分光光度计于490nm测其吸光值；

步骤3、将步骤2测得的吸光值代入步骤1得到的标准溶液曲线公式中即可得提取物稀释液中的多糖体含量。